课题基金基金详情
泛素化肿瘤抑制因子p53的化学合成及特异性去泛素化研究
结题报告
批准号:
21877024
项目类别:
面上项目
资助金额:
67.5 万元
负责人:
李宜明
依托单位:
学科分类:
B0702.生物分子的化学生物学
结题年份:
2022
批准年份:
2018
项目状态:
已结题
项目参与者:
方群玲、王君、王涛、孔一夫、白静思、管超建、孙帅帅
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
客服二维码
微信扫码咨询
中文摘要
肿瘤抑制因子p53的泛素修饰被发现在多种细胞内生物过程中发挥关键调控作用。然而泛素化p53的获取困难限制了其生化机制研究的开展。本项目拟在前期工作基础上运用转肽酶Sort A催化的酶促合成方法实现性质均一的不同类型泛素化p53的化学合成,并以合成蛋白为工具重构体外生化研究体系,探索去泛素化酶特异性去泛素化的生物化学机制。具体内容为:a. 优化Sort A催化的蛋白酰肼酶促合成方法,高效获得C端酰肼的p53片段;b. 运用泛素链酶促合成及辅基介导的连接方法获得不同链长及连接类型泛素修饰的p53片段,并与p53酰肼片段进行连接获得性质均一的泛素修饰p53;c. 建立精准的体外生物化学及生物物理研究体系,探索去泛素化酶对泛素修饰p53的特异性水解机制。通过本项目的实施力求拓展蛋白质酶促合成方法体系,阐明泛素修饰p53的去泛素化机制,也将充分展示蛋白质化学合成在翻译后修饰蛋白研究中的重要价值。
英文摘要
Ubiquitination of the tumor suppressor p53 has recently been found to play a key regulatory role in a variety of intracellular biological processes. However, the difficulty for obtaining ubiquitinated p53 protein greatly limits its development in biochemistry and biophysics studies. This project plans to use the transpeptidase Sort A assisted protein semisynthesis method for the chemical synthesis of different types of ubiquitinated p53 with uniform structure and properties. The synthetic protein acts as a tool to accurately reconstruct in vitro biochemical research system, and then to explore biochemical processes and biophysical mechanisms of specific deubiquitination for the deubiquitinase CYLD. The specific plan is: a. Optimize Sort A mediated protein hydrazide synthesis method to efficiently obtain a C-terminal hydrazide-containing p53 fragment; b. Ubiquitin chain enzymatic synthesis system and auxiliary-mediated ligation strategy were used to obtain the C-terminal p53 fragments with different site, chain length. The full length ubiquitinated p53 can be obtained through hydrazide based native chamical ligation between the C-terminal p53 fragments with p53 hydrazide fragment; c. Using synthetic protein as a tool to establish a precise in vitro biochemistry and biophysical research system and explore the selective hydrolysis mechanism of deubiquitinase CYLD for the hydrolysis of different ubiquitinated p53 with different site, chain length. Through the implementation of this project, we try to expand the enzymatic assisted protein semi-synthesis method and elucidate the selective hydrolysis mechanism of deubiquitinase for ubiquitinated p53, and will also exhibit the important value of protein chemical synthesis in the study of post-translational modified proteins.
以肿瘤抑制因子p53为代表的泛素化底物蛋白被体内的泛素修饰酶(E1,E2, E3)和去泛素化酶调控其泛素化水平。这些酶的功能异常或缺失将导致底物蛋白在细胞内的含量异常,进而引发诸如癌症等多种疾病。通过发展泛素化底物蛋白合成新方法,获取均一的泛素化蛋白样品,进一步构建精准的体外生化研究系统,成为了理解泛素酶系统调控底物蛋白功能的一个可行且高效的方法。在本项目的支持下,主要开展了两个方向的研究内容:a)发展泛素化底物蛋白合成新方法,主要包括基于新型辅基的自然化学链接策略、E1催化的化学酶法策略、微波辅助合成策略等;b) 将体外重构精准的泛素化蛋白用于泛素酶学系统的生化研究,主要包括去泛素化酶(DUB)活性的分析、结构机制的解析等。目前由本课题组发展泛素化底物蛋白的合成方法和构建的泛素酶学系统的生化研究体系已得到国际学术界的广泛应用。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
Chemical Synthesis of diSUMO Photoaffinity Probes for the Identification of PolySUMO Chain-Specific Interacting Proteins
用于鉴定 PolySUMO 链特异性相互作用蛋白的 diSUMO 光亲和探针的化学合成
DOI:10.31635/ccschem.020.202000282
发表时间:2021-04
期刊:CCS Chemistry
影响因子:11.2
作者:Wang Yu;Chen Chenchen;Meng Xianbin;Fan Jian;Pan Man;Chen Jingnan;Deng Haiteng;Shi Jing;Liu Lei;Li Yiming
通讯作者:Li Yiming
DOI:DOI:10.1021/jacs.8b13213
发表时间:2019
期刊:Journal of the American Chemical Society
影响因子:15
作者:Chu Guo-Chao;Pan Man;Li Jiabin;Liu Sanling;Zuo Chong;Tong Ze-Bin;Bai Jing-Si;Gong Qingyue;Ai Huasong;Fan Jian;Meng Xianbin;Huang Yi-Chao;Shi Jing;Deng Haiteng;Tian Changlin;Li Yi-Ming;Liu Lei
通讯作者:Liu Lei
An E1-Catalyzed Chemoenzymatic Strategy to Isopeptide-N-Ethylated Deubiquitylase-Resistant Ubiquitin Probes
E1 催化的抗异肽-N-乙基化去泛素化酶泛素探针的化学酶策略
DOI:10.1002/anie.202002974
发表时间:2020
期刊:Angewandte Chemie International Edition
影响因子:--
作者:Zheng Qingyun;Wang Tian;Chu Guo-Chao;Zuo Chong;Zhao Rui;Sui Xin;Ye Linzhi;Yu Yuanyuan;Chen Jingnan;Wu Xiangwei;Zhang Wenhao;Deng Haiteng;Shi Jing;Pan Man;Li Yi-Ming;Liu Lei
通讯作者:Liu Lei
Acid-sensitive auxiliary assisted atypical diubiquitin synthesis exploiting thiol-ene coupling
利用硫醇-烯偶联的酸敏感辅助辅助非典型双泛素合成
DOI:10.1016/j.tetlet.2019.151123
发表时间:2019
期刊:Tetrahedron Letters
影响因子:1.8
作者:Xiao Hua;Jing-Si Bai;Yi-Fu Kong;Guo-Chao Chu;Jing Shi;Yi-Ming Li
通讯作者:Yi-Ming Li
An activity-based probe developed by a sequential dehydroalanine formation strategy targets HECT E3 ubiquitin ligases
通过连续脱氢丙氨酸形成策略开发的基于活性的探针,针对 HECT E3 泛素连接酶
DOI:10.1039/c9cc03739j
发表时间:2019
期刊:Chemical communications
影响因子:4.9
作者:Xu Ling;Fan Jian;Wang Yu;Zhang Zhongping;Fu Yao;Li Yi-Ming;Shi Jing
通讯作者:Shi Jing
细胞区室靶向的原位激活泛素工具蛋白的化学合成与应用
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    54万元
  • 批准年份:
    2022
  • 负责人:
    李宜明
  • 依托单位:
毒素蛋白探针的化学合成及其生物学应用
  • 批准号:
    21572043
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    30.0万元
  • 批准年份:
    2015
  • 负责人:
    李宜明
  • 依托单位:
转肽酶Sortase A催化的新反应及其在蛋白质修饰中的应用
  • 批准号:
    21372058
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    80.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    李宜明
  • 依托单位:
自噬小体标记蛋白LC3-II荧光衍生物的半合成及调控细胞自噬机理的研究
  • 批准号:
    21102083
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    25.0万元
  • 批准年份:
    2011
  • 负责人:
    李宜明
  • 依托单位:
国内基金
海外基金