复制缺损型HBV载体表达siRNA抑制HBV复制的研究

近两年在《自然》《科学》等国际权威杂志大量报道了siRNA有诱导基因沉默的作用，我们近期实验结果也证明复制缺损型HBV载体能携带外源基因并正确包装。本课题拟先构建适合高效表达siRNA并高效包装的新型HBV载体，对表达野生型HBV的质粒修饰，使其不表达除P蛋白外的其它蛋白，逐段删除部分C基因区，插入H1启动子及靶向GFP的发卡状siRNA，证明其对GFP表达的抑制作用，并筛选出一个包装效率最优者，删除其siRNA，作为HBV载体；设计10个靶向HBV保守序列的siRNA，先在细胞水平观察其抑制HBV复制的作用；以EB病毒载体表达野生型HBV，用水动力学方法转染裸DNA，构建新型HBV感染大鼠模型，用共转染法在动物体内观察抗HBV疗效、重组HBV的形成及毒性反应。利用野生型HBV为载体提供包装，分泌抗HBV的HBV样颗粒，实现导向性及放大效应，为临床抗HBV治疗探索一条一次性廉价疗法新途径。