Linc-MD1竞争性结合microRNAs调控山羊肌卫星细胞成肌分化的分子机制
结题报告
批准号:
31772566
项目类别:
面上项目
资助金额:
63.0 万元
负责人:
凌英会
依托单位:
学科分类:
C1702.家畜种质资源与遗传育种学
结题年份:
2021
批准年份:
2017
项目状态:
已结题
项目参与者:
张子军、刘洪瑜、黄伟平、权青、陈涛、睢梦华、郑琪
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中文摘要
肌卫星细胞成肌分化是动物肌肉发育、更新及再生的重要基础,而其调控机制,尤其是转录后调节机制尚不明确。根据申请人对山羊肌源性miRNAs前期试验,结合最新研究,推测在山羊肌卫星细胞成肌分化的过程中,长链非编码RNA linc-MD1介导了一个转录后调控新路径,即linc-MD1竞争性结合肌源性miRNAs,调控下游转录因子的表达,进而影响山羊肌卫星细胞的成肌分化。为此,本项目首先分析linc-MD1对山羊肌卫星细胞成肌分化的调控作用;进而利用CHIRP-Seq和Luciferase assays甄别其竞争性结合的miRNAs,及其下游靶标基因;最后以山羊肌卫星细胞为试验对象,利用RNA干扰、荧光定量PCR和western-blot等技术探明linc-MD1对特异miRNAs的竞争作用,及其对相关基因表达的调控过程。以期探明linc-MD1通过miRNAs调控山羊肌卫星细胞成肌分化的分子机制。
英文摘要
The myogenic differentiation of muscle satellite cell is an important basis for animal skeletal muscle development, renew and regeneration, however, its regulatory mechanism, especially the post-transcriptional regulation mechanism is not clear. According to the applicant's previous study on goat myogenic miRNAs, combined with the latest research, it is speculated that long noncoding RNA linc-MD1 can competitively bind to myogenic miRNAs, thereby regulating the expression of downstream transcription factors, further affects the differentiation of goat muscle satellite cells. In the study, we will analyze the regulation of linc-MD1 on myogenic differentiation of goat muscle cells, and use CHIRP-Seq and Luciferase assays to screen for the miRNAs which were competed by linc-MD1, and their downstream target genes. At the end of the study, the competition effect of linc-MD1 on specific miRNAs and the regulation of related gene expression will be studied by RNA interference, real-time PCR and western-blot,in order to investigate the molecular mechanism of linc-MD1 regulates myoblastic differentiation of goat muscle cells through competing for shared miRNAs.
肌卫星细胞成肌分化是动物肌肉发育、更新及再生的重要基础,而其调控机制,尤其是转录后调节机制尚不明确。为此,本研究以组内前期高通量测序获得的在山羊肌肉组织中差异表达的lncRNAs和肌源性miRNAs信息为基础,选择linc-MD1为主要研究对象;利用生物信息学、CHIRP-Seq和Luciferase assays筛选并确定,用于后续实验的目标肌源性miRNAs为miR-133a-3p,下游靶基因为DCTN2。Linc-MD1和miR-133a-3p的表达谱显示两者均具有肌肉组织特异性,表明它们与山羊骨骼肌的生长发育相关且可能参与骨骼肌卫星细胞的分化。然后以山羊肌卫星细胞为试验材料,通过细胞瞬时转染技术,干扰Linc-MD1和过表达miR-133a-3p后,对骨骼肌卫星细胞分化标志基因的检测结果表明Linc-MD1能够促进山羊骨骼肌卫星细胞的分化,而miR-133a-3p则能够抑制骨骼肌卫星细胞的分化;si-DCTN2后,qPCR检测骨骼肌卫星细胞分化标志基因,表明DCTN2能促进骨骼肌卫星细胞的分化,该结果与miR-133a-3p对肌卫星细胞的作用相反。最后,利用qPCR和western-blot等技术检测出Linc-MD1的表达水平可以受到miR-133a-3p的调节,说明Linc-MD1通过竞争性靶向结合miR-133a-3p来调控骨骼肌卫星细胞的分化。该项研究在理论上可望在肌肉细胞定向分化分子机制等方面取得突破性发现,为进一步揭示骨骼肌生长发育相关基因调控研究提供新的探索途径和理论基础。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2019.12.003
发表时间:2019
期刊:西北农林科技大学学报. 自然科学版
影响因子:--
作者:郑琪;睢梦华;朱露;吴昊;敬敬;储明星;刘勇;李文雍;张子军;张运海;凌英会
通讯作者:凌英会
DOI:10.3389/fgene.2019.01040
发表时间:2019-10-25
期刊:FRONTIERS IN GENETICS
影响因子:3.7
作者:Ling, Ying-hui;Zheng, Qi;Xu, Li-na
通讯作者:Xu, Li-na
DOI:10.1186/s12864-021-07896-5
发表时间:2021-07-27
期刊:BMC genomics
影响因子:4.4
作者:Jing J;Jiang X;Zhu C;Zheng Q;Ji Q;Yin H;Huang J;Zhu Y;Wang J;Qin S;Ling Y
通讯作者:Ling Y
miR-99a-5p inhibits target gene FZD5 expression and steroid hormone secretion from goat ovarian granulosa cells1
miR-99a-5p 抑制山羊卵巢颗粒细胞靶基因 FZD5 表达和类固醇激素分泌1
DOI:--
发表时间:--
期刊:Journal of Integrative Agriculture
影响因子:4.8
作者:ZHU Lu;JING Jin;QIN Shuai-qi;LU Jiani;ZHU Cuiyun;ZHENG Qi;LIU Ya;FANG Fu-gui;LI Yun-sheng;ZHANG Yun-hai;LING Ying-hui
通讯作者:LING Ying-hui
DOI:10.1186/s40709-019-0095-9
发表时间:2019-05
期刊:Journal of Biological Research-Thessaloniki
影响因子:3.3
作者:Quan Qing;Zheng Qi;Ling Yinghui;Fang Fugui;Chu Mingxing;Zhang Xiaorong;Liu Yong;Li Wenyong
通讯作者:Li Wenyong
m6A修饰介导MEF2C表达调控山羊肌纤维类型转化的作用及机制
  • 批准号:
    32372832
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    50万元
  • 批准年份:
    2023
  • 负责人:
    凌英会
  • 依托单位:
Stomatin调控山羊成肌细胞融合的作用及机制
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    面上项目
  • 资助金额:
    58万元
  • 批准年份:
    2021
  • 负责人:
    凌英会
  • 依托单位:
miR-27b介导Pax3基因调控山羊骨骼肌细胞增殖与分化研究
  • 批准号:
    31301934
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    24.0万元
  • 批准年份:
    2013
  • 负责人:
    凌英会
  • 依托单位:
国内基金
海外基金