脊髓小脑变性3型蛋白磷酸化对其特性和细胞毒性的影响

本课题主要根据我们最近发现的ataxin-3的磷酸化，及其S256磷酸化位点突变后ataxin-3聚集性明显增强这一现象，研究磷酸化ataixn-3的蛋白特性改变和细胞毒性作用，以及磷酸化ataxin-3的病理意义。我们将运用SH-SY5Y细胞，转染脊髓小脑变性3型（MJD）野生型和突变型基因的表达载体，包括S256A（非磷酸化形式突变体）和S256D（模拟磷酸化形式突变体），观察不同磷酸化形式的脊髓小脑变性3型蛋白（ataxin-3）的细胞毒性作用的改变。同时，制备S256位点的特异性磷酸化抗体,检测病人和对照脑样本中该位点的磷酸化状态,明确该位点磷酸化的在体意义及其与疾病的关联性。同时，在细胞模型中积极筛选能抑制其聚集的化学和分子伴侣，为该病的治疗提供基础。 因而，本研究将运用分子生物学和细胞生物学等手段，对体外模型和在体样本进行研究，探索ataxin-3的磷酸化修饰与疾病的关联性。