新糖基因Glt25D2克隆及在HBV糖基化修饰中的作用研究

本研究主要目的在于体外克隆表达HBV基因编码大蛋白功能相关的一个人类新糖基转移酶基因，并对其功能进行初步研究。主要内容包括：（1）利用体外基因克隆表达技术，通过原核表达、真核表达，纯化新的人类糖基因编码糖基转移酶Glt25D2；（2）利用纯化的新糖基转移酶制备抗体，对该糖基转移酶在肝细胞内的定位、肝脏组织分布特征进行初步观察；（3）利用同位素标记技术明确新糖基转移酶的底物特异性，并对该酶的活性做初步分析；（4）结合双向电泳技术、生物质谱技术，对该糖基转移酶在蛋白质糖基化修饰中的作用做初步探讨；（5）借助于HBV体外表达细胞系HepG2.2.15，利用RNAi技术进一步明确，删除该糖基转移酶活性，对HBV包膜蛋白糖基化修饰的影响，试图阐述该酶对HBV病毒颗粒组装、成熟以及分泌可能的作用，籍此验证该酶的糖基化作用位点。以期进一步明确该酶在蛋白质N-糖基化修饰过程中可能的生物学作用。