PDE5和iNOS基因修饰的自体脂肪干细胞移植治疗勃起功能障碍

目前，勃起功能障碍的基因治疗主要选择NO-cGMP通路中的关键酶作为靶点，对阴茎海绵体平滑肌细胞进行直接干预。脂肪干细胞(ADSCs)是2001年发现的一种新的成体干细胞，取材简单，体内含量丰富。研究表明干细胞在治疗ED方面具有巨大的潜力。但是，单纯性干细胞治疗糖尿病ED的效果尚不十分理想。本研究采用iNOS和PDE5-siRNA基因修饰的ADSCs进行糖尿病ED大鼠的治疗，以期发现更有效的ED治疗方法以及探索相应的作用机制。.本课题组建立了iNOS和PDE5-siRNA基因修饰的ADSCs，并从整体水平和分子水平对iNOS和PDE5-siRNA基因修饰的ADSCs治疗糖尿病ED的疗效、作用时间和具体机制进行相关研究。得出以下结果：（1）用RT-PCR和WesternBlot方法筛选出稳定表达的iNOS和针对PDE5的siRNA，将iNOS和siRNA构建到病毒载体上，并转染ADSCs，成功构建单基因和双基因修饰的ADSCs。（2）iNOS修饰的ADSCs治疗1w和2w后，均可明显改善DM大鼠勃起功能；PDE5修饰的ADSCs治疗1w后，可明显改善DM大鼠勃起功能，但差于iNOS修饰的ADSCs治疗组，而2w后可明显改善DM大鼠勃起功能；iNOS和PDE5修饰的ADSCs治疗效果与iNOS修饰的ADSCs相似。其效果均显著优于单纯ADSCs的治疗效果。（3）iNOS和PDE5-siRNA基因修饰的ADSCs可释放NO并旁分泌大量IGF-1和VEGF，增加海绵体平滑肌含量，降低海绵体纤维化程度。.本研究联合使用了基因治疗和干细胞治疗的方法，并证实其优于单纯的干细胞治疗。同时，发现基因修饰的ADSCs治疗ED具有明显的时效性，即PDE5-siRNA基因修饰的ADSCs在1w时可改善大鼠勃起功能，但在第2w时的治疗作用更佳。并对具体治疗机制进行了探索，勃起功能的改善与基因修饰的ADSCs释放NO和旁分泌大量生长因子有关。从而为ED的治疗找到一种卓有成效的新方法。