应用HDAC抑制剂重建肝癌肝移植术后肿瘤免疫监视功能的研究

本研究通过应用他克莫司处理人NK92株，建立耐受性NK细胞模型来模拟肝癌肝移植受体来源NK细胞的功能，在体外应用新型组蛋白去乙酰化酶（HDAC）抑制剂FK228，提高耐受性NK细胞对人肝癌细胞HepG2的杀伤效应；通过流式细胞术、Western Blot等技术，研究FK228调节肝癌细胞表面的MICA分子表达、NK细胞表面的NKG2D受体表达以及NK细胞激活后的信号转导，来探讨FK228提高耐受性NK细胞对肝癌细胞杀伤效应的机制，并寻找其关键分子；通过肝癌肝移植大鼠模型，在体内研究FK228预防或延迟肝癌复发转移以及对肝移植排斥反应发生率的影响，探索体内肿瘤免疫监视功能重建的可行性，为临床肝癌肝移植受体术后预防肝癌复发转移提供新思路和新方法。

组蛋白乙酰化修饰是基因表观遗传调控的重要方式，研究发现组蛋白去乙酰化酶功能异常可以导致肿瘤相关基因的异常表达，从而在癌症的发生发展中有着重要的作用。组蛋白去乙酰化酶在不同肿瘤中的作用及其抑制剂的开发以及在肿瘤治疗中的运用也越来越成为人们研究的热点。肝癌作为一个难治性肿瘤，其发生机制仍不清楚，也缺乏有效地治疗方法。因此，本研究的方向主要集中在组蛋白去乙酰化酶家族蛋白，及其抑制剂在肝癌发生机制及治疗中的作用，为揭示肝癌的发生机制以及治疗方法需找新的思路。本课题主要研究了组蛋白去乙酰化酶家族Ⅰ类成员HDAC1，HDAC2，HDAC3、HDAC8、 HDACsⅡa类成员HDAC6在肝癌发生发展中的作用以及HDAC制剂对NK细胞杀伤能力的影响。通过研究我们发现，HDAC1、2、3的高表达与肝癌的细胞的增殖指数相关，体外抑制HDAC2和3能够明显降低肝癌细胞的增殖侵袭。并首次证实了HDAC2,HDAC3的表达与肝移植术后肝癌复发及患者生存率密切相关，进一步分析提示HDAC1,2,3的联合评估可以更有效预测肝癌肝移植术后肿瘤的复发率。对HDAC8的研究，我们发现HDAC8在肝癌组织中的表达明显高于癌旁，抑制HDAC8的表达能够明显降低肝癌细胞的增殖，并通过bcl-2凋亡通路而促进肝癌细胞的凋亡。而HDAC6则能够促进肝癌细胞的增殖和侵袭，参与影响肝癌发生的许多重要通路与生物学过程，并与肝癌细胞的耐药以及缺氧耐受以及肝癌肝移植病人的预后密切相关。另外我们发现HDAC抑制剂VPA、SAHA能够明显抑制肝癌细胞增殖，诱导肝癌细胞周期停滞并促进肝癌细胞凋亡。对NK细胞的研究我们发现，他克莫司能抑制NK细胞表面NKG2D受体的表达，而增强NKG2A受体的表达。经他克莫司处理的NK92细胞，其杀伤活性有所下降。但HDAC抑制剂FK228可以使NK92细胞杀伤活性部分恢复。他克莫司降低NK92细胞的杀伤活性的机理是降低分泌IFN-gamma，增加IL-10分泌。通过我们的研究，证实了多个HDACs家族成员参与肝癌的发生发展，并与肝癌以及肝癌肝移植病人预后密切相关，并证实了HDAC抑制剂对肝癌细胞的作用的有效性以及对NK细胞杀伤能力的增强作用。这些研究对进一步揭示肝癌进展的表观遗传调控分子机制，调控分子机制，建立合理的肝癌肝移植术后肿瘤复发的评估体系，寻求有效的肝癌防治手段具有积极的意义

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