Ti质粒介导的藓羽藻原生质团聚体再生藻株重组表达系统的研究

农杆菌作为外源基因的载体，不仅在植物转基因上得到了广泛应用，而且在真菌转化方面也取得了可喜进展，但到目前为止，仍然没有农杆菌介导的藻类转基因的报道。本研究拟选用广谱农杆菌菌株,并对根癌农杆菌Ti质粒进行加工改造，使用强启动子，农杆染型质粒超驱动序列、内含子和核基质附着区等来增加藻类植物对农杆菌的敏感性，使其能将所携带的外源基因整合到藻类基因组。藓羽藻是一种多核单细胞海洋绿藻。它的全能性不同于高等植物的细胞全能性，其原生质在没有细胞膜和壁的情况下能团聚成球并发育成成熟植株。若在团聚时加入构建好的重组质粒，外源基因便能被包裹在团聚体内。此操作省略了复杂的基因转化过程，而且使转化系统和转化方法融为一体，简单方便。对转化条件进行优化，以期能将此海藻作为廉价生物反应器用于生产有用的外源蛋白。由于藓羽藻极易破碎，重组表达的目标蛋白可以应用膨化床吸附技术而得到规模化纯化。