从TRP超家族角度探讨kca3.1调控系膜细胞收缩的分子机制

目的：从TRPC通道角度探讨Kca3.1参与系膜细胞收缩的机制。方法：本课题：1.首次采用免疫荧光探讨TRPC通道TRPC3/6/7和TRPC1、4/5亚型（TRPC2在人类为假基因）在肾脏系膜细胞上的定位、表达；采用Westerblot 和 RT-PCR技术观察在静息与血管紧张素Ⅱ刺激状态下TRPC1、4/5和3/6/7在系膜细胞上的蛋白表达变化；加用TRPC通道抑制剂SKF96365和Kca3.1通道抑制剂Tram34，采用MTT和流式细胞后对系膜细胞增殖和细胞周期的影响；2. 同时，建立大鼠IgA肾病模型，观察模型组和钙神经酶抑制剂（CaNi）组Kca3.1、TRPC1、4/5和3/6/7及钙神经酶蛋白和mRNA的表达变化； 3.观察中药方剂对系膜细胞周期蛋白和细胞间连接的影响。结果：1. TRPC通道亚型TRPC1和TRPC3/6/7在肾脏系膜细胞上定位于细胞膜； 2. 用血管紧张素Ⅱ不同浓度刺激系膜细胞后，细胞增殖明显，其中100nmol/L作用24小时时增殖作用最明显；同时Westernblot实验结果显示Kca3.1和TRPC3/6/7的表达增多，TRPC1蛋白表达减少，a-SMA和vinculin的表达增多。给予Tram34 后细胞增殖的抑制改变不明显，但SKF96365 可以明显抑制细胞增殖，其中20nmol/L作用24小时时抑制作用最明显。因此通道Kca3.1和TRPC参与了大鼠系膜细胞的增殖，且可能与TRPC1表达下调和TRPC3/6/7表达上调有关；3.建立IgA大鼠模型并给与CaNi（Tac）后，大鼠血尿和蛋白尿明显下降，TRPC3/6/7和CaN表达下降，而Kca3.1和TRPC1、4/5的表达变化不显著；4.中药方剂祛风通络方抑制肾小球系膜细胞增殖、减少阿霉素模型鼠尿蛋白，并改善肾功能，其作用可能与其调节Cx36蛋白及基因表达以及下调周期蛋白cylinD1、CDK2和P21，上调p27的表达有关。结论： 1.Kca3.1与TRPC通道可能参与系膜细胞增殖，可能TRPC3/6/7和Kca3.1形成通道复合物起作用有关；2.Tac可以减少系膜细胞增殖，可能与下调TRPC3/6/7和CaN表达有关，与TRPC1和Kca3.1无关。