Ultrasensitive quantification of TAP-dependent antigen compartmentalization in scarce primary immune cell subsets.
Ultrasensitive quantification of TAP-dependent antigen compartmentalization in scarce primary immune cell subsets.
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DOI：
10.1038/ncomms7199
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发表时间：
2015-02-06
影响因子：
16.6
通讯作者：
Tampe, Robert
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fischbach, Hanna;Doering, Marius;Nikles, Daphne;Lehnert, Elisa;Baldauf, Christoph;Kalinke, Ulrich;Tampe, Robert
在主要组织相容性复合物I类（MHC I）上的肽的呈递对于建立和维持自身耐受性、抗原特异性CD8+ T细胞的引发和几种T细胞效应器功能的发挥是必不可少的。胞浆蛋白酶体持续将蛋白质降解成肽，肽通过与抗原加工相关的转运蛋白（TAP）主动转运穿过内质网（ER）膜。在ER腔中，抗原肽被装载到MHC I上，其展示在细胞表面上。在这里，我们描述了一种创新的流式细胞术的方法来监测时间分辨的ER区室化的抗原肽。该测定允许在1 nM的报告肽浓度下分析不同的原代人免疫细胞亚群。因此，这种超灵敏的方法首次允许在接近生理条件下在稀缺的原代细胞亚群如抗原交叉呈递树突细胞中定量TAP活性。 抗原肽在通过TAP转运蛋白进入ER后装载到主要组织相容性复合物I类（MHC I）分子中。在这里，Fischbach等人开发了一种流式细胞术测定法来监测TAP依赖性肽易位，该测定法足够灵敏以用于稀缺的原代细胞亚群。
Presentation of peptides on major histocompatibility complex class I (MHC I) is essential for the establishment and maintenance of self-tolerance, priming of antigen-specific CD8+ T cells and the exertion of several T-cell effector functions. Cytosolic proteasomes continuously degrade proteins into peptides, which are actively transported across the endoplasmic reticulum (ER) membrane by the transporter associated with antigen processing (TAP). In the ER lumen antigenic peptides are loaded onto MHC I, which is displayed on the cell surface. Here we describe an innovative flow cytometric approach to monitor time-resolved ER compartmentalization of antigenic peptides. This assay allows the analysis of distinct primary human immune cell subsets at reporter peptide concentrations of 1 nM. Thus, this ultrasensitive method for the first time permits quantification of TAP activity under close to physiological conditions in scarce primary cell subsets such as antigen cross-presenting dendritic cells. Antigenic peptides are loaded into major histocompatibility complex class I (MHC I) molecules after entering the ER via the TAP transporter. Here, Fischbach et al. develop a flow cytometry assay to monitor TAP-dependent peptide translocation that is sensitive enough to use on scarce primary cell subsets.
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DOI：
10.1084/jem.20121103
发表时间：
2013-05-06
期刊：
The Journal of experimental medicine
影响因子：
--
作者：
Segura E;Durand M;Amigorena S
通讯作者：
Amigorena S
影响因子：
32.4
作者：
Koopmann, JO;Albring, J;Momburg, F
通讯作者：
Momburg, F
影响因子：
4
作者：
Ghanem, Esther;Fritzsche, Susanne;Springer, Sebastian
通讯作者：
Springer, Sebastian
影响因子：
15.9
作者：
Gehring, Adam J.;Haniffa, Muzlifah;Bertoletti, Antonio
通讯作者：
Bertoletti, Antonio
影响因子：
3.2
作者：
SALTER, RD;HOWELL, DN;CRESSWELL, P
通讯作者：
CRESSWELL, P