HSV-1 vector-mediated gene transfer of the human nerve growth factor receptor p75hNGFR defines high-affinity NGF binding
HSV-1 vector-mediated gene transfer of the human nerve growth factor receptor p75hNGFR defines high-affinity NGF binding
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HSV-1 载体介导的人神经生长因子受体 p75hNGFR 基因转移定义了高亲和力 NGF 结合
作者：
D. Battleman;A. Geller;M. Chao
已经构建了一系列重组单纯疱疹病毒（HSV-1）载体，其编码人p75 NGF受体（p75 hNGFR）的全长cDNA或受体的截短形式。用病毒原液感染培养的成纤维细胞导致所有三种cDNA的大量表达，如通过亲和交联、免疫印迹分析和平衡结合所检测到的。此外，原代神经元培养物的病毒感染通过免疫荧光和亲和交联给出容易检测的p75表达。当通过病毒感染将p75引入表达trk原癌基因的成纤维细胞中时，产生了一个新的结合位点，与高亲和力NGF结合一致。该位点不是由缺乏受体的细胞外配体结合结构域或细胞质结构域的截短形式的p75的共表达产生的，这表明受体的这两个区域都是形成高亲和力NGF结合位点所必需的。因此，这些HSV-1载体在病毒感染后产生适当的NGF受体结合。这些HSV-1的构建体的应用，以原代神经元培养和体内模型的p75 NGFR功能进行了讨论。
A series of recombinant herpes simplex virus (HSV-1) vectors have been constructed that encode either the full-length cDNA of the human p75 NGF receptor (p75hNGFR) or truncated forms of the receptor. Infection of cultured fibroblast cells with viral stocks results in abundant expression of all three cDNAs, as detected by affinity cross-linking, immunoblot analysis, and equilibrium binding. Furthermore, viral infection of primary neuronal cultures gives easily detectable p75 expression by immunofluorescence and affinity cross-linking. When p75 was introduced by viral infection into fibroblast cells expressing the trk proto-oncogene, a new binding site was created, consistent with high-affinity NGF binding. This site is not created by the coexpression of truncated forms of p75 that lack either the extracellular ligand binding domain or the cytoplasmic domain of the receptor, suggesting that both of these regions of the receptor are required for the formation of the high-affinity NGF binding site. Hence, these HSV-1 vectors give rise to appropriate NGF receptor binding after viral infection. The application of these HSV-1 constructs to primary neuronal culture and in vivo models of p75NGFR function is discussed.
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