Improved quantitative detection of VBNC Vibrio parahaemolyticus using immunomagnetic separation and PMAxx-qPCR
Improved quantitative detection of VBNC Vibrio parahaemolyticus using immunomagnetic separation and PMAxx-qPCR
复制标题
使用免疫磁分离和 PMAxx-qPCR 改进 VBNC 副溶血弧菌的定量检测
DOI：
10.1016/j.foodcont.2019.106962
复制
发表时间：
2020-04
期刊：
影响因子：
6
通讯作者：
Li Wang
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lichao Zhao;Xinrui Lv;Xiao Cao;Jingfeng Zhang;Xiaokui Gu;Haiyan Zeng;Li Wang
免疫磁性分离是从复杂食品样品中特异性富集和纯化食源性致病菌的有效方法。为了以更高的准确度和灵敏度检测活的但不可培养的（VBNC）副溶血性弧菌（V. parahaemolyticus），我们使用了改进的单叠氮丙啶（PMAxx）染料，以消除IMS-PMAxx-实时（定量）聚合酶链反应（IMS-PMAxx-qPCR）测定中的死细胞干扰。我们利用链霉亲和素标记的磁性纳米颗粒和生物素标记的多克隆抗体制备了免疫磁珠，并优化了反应条件，建立了VBNCV的IMS检测方法。副溶血性我们确定了最佳抗体量（30 μg）、IMBs体积（150 μL）、孵育时间（45 min）、免疫磁性分离时间（4 min）和分离温度（25 °C）。IMS-PMAxx-qPCR方法可检测VBNCV。在未进行任何预富集的情况下，在生虾样品中检测到低至1.85 CFU/g水平的副溶血性毒素。IMS-PMAxx-qPCR测定是高度灵敏的、选择性的、简单的和快速的（<4小时），并且优于基于常规PCR的测定。因此，该方法可以潜在地提高VBNCV的快速检测。生虾中的副溶血性毒素。
Immunomagnetic separation (IMS) is an effective method for specific enrichment and purification of target food-borne pathogens from complex food samples. To detect viable but non-culturable (VBNC)Vibrio parahaemolyticus(V. parahaemolyticus) with greater accuracy and sensitivity, we used an improved propidium monoazide (PMAxx) dye to eliminate dead cell interference in an IMS-PMAxx-real-time (quantitative) polymerase chain reaction (IMS-PMAxx-qPCR) assay. We prepared immunomagnetic beads (IMBs) using streptavidin-conjugated magnetic nanoparticles and biotinylated polyclonal antibodies, and optimized the reaction conditions to establish an IMS method for VBNCV. parahaemolyticus. We determined the optimal antibody amount (30 μg), IMBs volume (150 μL), incubation time (45 min), immunomagnetic separation time (4 min), and separation temperature (25 °C). The IMS-PMAxx-qPCR method could detect VBNCV. parahaemolyticusin raw shrimp samples at levels as low as 1.85 CFU/g without any pre-enrichment. The IMS-PMAxx-qPCR assay is highly sensitive, selective, simple, and rapid (<4 h), and outperformed the conventional PCR based assays. Thus, this method can potentially improve rapid detection of VBNCV. parahaemolyticusin raw shrimp.
登录
查看更多内容
影响因子：
3.7
作者：
Han H;Li F;Yan W;Guo Y;Li N;Liu X;Zhu J;Xu J;Chen Y;Li X;Lv H;Zhang Y;Cai T;Chen Y
通讯作者：
Chen Y
影响因子：
5.7
作者：
Keserue HA;Baumgartner A;Felleisen R;Egli T
通讯作者：
Egli T
使用 IMS、脱氧胆酸钠、PMA 和实时定量 PCR 组合工艺快速准确地检测牛奶中的活大肠杆菌 O157:H7
影响因子：
6
作者：
Xu, Feng;Lai, Weihua;Xiong, Yonghua;Wei, Hua
通讯作者：
Wei, Hua
影响因子：
6
作者：
Xu, Xiaoke;Wu, Qingping;Wu, Kui
通讯作者：
Wu, Kui
DOI：
10.1016/j.ijfoodmicro.2017.11.011
发表时间：
2018-02-02
影响因子：
5.4
作者：
Randazzo, Walter;Khezri, Mohammad;Sanchez, Gloria
通讯作者：
Sanchez, Gloria