Functional annotation of uncharacterized two-substrate enzymes

死亡在den letzten Jahren massenhaft durchgef<s:1> - 1基因组序列<e:1> - 1基因组鉴定- 2 - 1基因。[1][0][0][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1]。insbesonere die Entdeckung neuer酶verspricht Einblicke在bisher unbekannte Bereiche des zellulären代谢和在die分子进化与蛋白质。Wir möchten dieses问题是由neinem neutigen Ansatz angehen，在这些问题中，Wir - auf酶konzentrieren， die - zwei底物- ein bekanntes和ein unbekanntes - umsetzen。本文研究了一种新型的基因重组酶，该酶在蛋白质蛋白中的作用，即基因重组酶的作用。用高效液相色谱法（HPLC）、酶谱法（ms）、质谱法（ms）和核磁共振法（NMR）鉴定酶和产物。在Vorarbeiten konnten wir die durchfhhrbarkeit dieses Ansatzes anhand eines酶bekannter funkter zeigen und wollen ihnnaufzwei酶（prcrb und trpb20） andwenden，死在strukturr und Sequenz Ähnlichkeiten zu zwei von uncharakterisierten酶ausder biosyn这些von组氨酸和色氨酸（HisF und TrpB1） haben， aber andere和bisher unbekannte Funktionen aus<e:1>。疫病病原学研究ergänzt durch die分析敲除Stämmen，在denen die pcrB- bzw。trpb20 -基因deletiert wurden和deren Wachstumsverhalten weitere Einsichten在die function的翻译结果：

Die in den letzten Jahren massenhaft durchgeführte Sequenzierung mikrobieller Genome führte zur Identifizierung zahlreicher unbekannter Gene. Die Funktionsaufklärung der von diesen Genen kodierten Proteine ist eine schwierige und zugleich wichtige Herausforderung der molekularen Biologie. Insbesondere die Entdeckung neuer Enzyme verspricht Einblicke in bisher unbekannte Bereiche des zellulären Metabolismus und in die molekulare Evolution von Proteinen. Wir möchten dieses Problem mit einem neuartigen Ansatz angehen, in dem wir uns auf Enzyme konzentrieren, die zwei Substrate – ein bekanntes und ein unbekanntes – umsetzen. Dazu werden wir das bekannte Substrat radioaktiv markieren und zusammen mit dem rekombinant hergestellten Enzym unbekannter Funktion in einem proteinfreien Zellextrakt inkubieren, der das unbekannte Substrat bereitstellt. Nach dem Umsatz der beiden Substrate durch das Enzym wird das Produkt mit Hilfe seiner Markierung über HPLC aus dem Zellextrakt gereinigt und anschließend mittels Massenspektrometrie und NMR identifiziert. In Vorarbeiten konnten wir die Durchführbarkeit dieses Ansatzes anhand eines Enzyms bekannter Funktion zeigen und wollen ihn nun auf zwei Enzyme (PcrB und TrpB2o) anwenden, die in Struktur und Sequenz Ähnlichkeiten zu zwei von uns charakterisierten Enzymen aus der Biosynthese von Histidin und Tryptophan (HisF und TrpB1) haben, aber andere und bisher unbekannte Funktionen ausüben. Diese Untersuchungen werden ergänzt durch die Analyse von knock-out Stämmen, in denen die pcrB- bzw. trpB2o- Gene deletiert wurden und deren Wachstumsverhalten weitere Einsichten in die Funktion dieser beiden Enzyme verspricht.