The role of the lysine-5-hydroxylase Jmjd6 for splicing

Der von Fadok et.al im Jahre 2000 entdeckte pseudotative Phosphatidylserinrezeptor（PSR）wurde inzwischen in Jmjd6 umbenannt（Fadok et al.，2000年）。这很奇怪，因为没有膜反应器。这是一种来自Jumonji家族的蛋白质，在过去的几年里，它一直在增加，因为它是一种组织氨酰去甲基化的蛋白质，用于染色质修饰。Jmjd6 ist，trotz einer dies suppenden Publlikation（Chang et al.，2007），keine Histondemethylase.这会让我失望的。Das Protein hat große Achnlichkeit mit der Aspartathydroxylase FIH-1，deren Substrat der“Hypoxia induced”Transkriptionsfaktor ist，der die Antwort der Zelle auf Sauerstoffmangel bestimmt（Cikala et al.，2004年）。在我们的主题（BO 1748/3-3）中，我们发现Jmjd 6有一种酶活性，即羟基蛋白质和赖氨酸。一种Zielprotein是U2 AF-65的特异性因子。将U2 AF-65与Jmjd 6结合，并与Lys 15、Lys 276和Lys 290结合。我们还知道，HeLa细胞中的内源性U2 AF-65是一种羟基化酶。我们先用一种赖氨酸羟基化的方法，然后再用一种不含蛋白质的方法。在我们看来，Jmjd 6的遗传调节对报告者的替代选择有影响，最重要的是它具有U2 AF-65修饰酶的功能。因此，我们可以通过对Jmjd 6敲除Mäusen和敲除Zebrafischen的明显的entwicklungsgeschädigte Phänotyp的分析来确定Jmjd 6和Zebrafischen的活性（在（Wolf et al.，2007））erklärt韦尔登könnte. Antrag将用赖氨酸-5-羟基化的核蛋白质来诱导Pre-mRNAs的表达。因此，我们将对SILAC-实验中的U2 AF-65进行羟基化，以进行定量分析。我们将在一个蛋白质组学分析中进行分离，然后将Jmjd 6和赖氨酸羟基化的蛋白质分离。Drittens wollen wir Spleißvarianten detektierende Mikroarrays durchführen und untersuchen，welche Gene ihr Spleißen verändern，wenn Jmjd6 fehlt or der überexplanert wird.我们将通过将羟基从Spleißfaktoren转化为Spleißen来研究其机理。

Der von Fadok et.al im Jahre 2000 entdeckte putative Phosphatidylserinrezeptor (PSR) wurde inzwischen in Jmjd6 umbenannt (Fadok et al., 2000). Es hat sich gezeigt, dass er kein Membranrezeptor ist. Es handelt sich um ein Protein aus der Jumonji-Familie, die in den letzten Jahren dadurch Aufmerksamkeit erlangte, dass sie einige Histonlysyldemethylasen beherbergt, die für die Chromatinmodifikationen eine Rolle spielen. Jmjd6 ist, trotz einer dies behauptenden Publikation (Chang et al., 2007), keine Histondemethylase. Das wird im folgenden gezeigt. Das Protein hat große Ähnlichkeit mit der Aspartathydroxylase FIH-1, deren Substrat der „Hypoxia induced“ Transkriptionsfaktor ist, der die Antwort der Zelle auf Sauerstoffmangel bestimmt (Cikala et al., 2004). In unserem letzten Antrag zu dieser Thematik (BO1748/3-3) haben wir herausgefunden, dass Jmjd6 eine ähnliche Enzymaktivität hat, es hydroxyliert Proteine an Lysinresten. Ein Zielprotein ist dabei der Spleißfaktor U2AF-65. Wir haben gezeigt, dass U2AF-65 von Jmjd6 gebunden und an Lys 15, Lys 276 and Lys 290 hydroxyliert wird. Wir konnten auch nachweisen, dass endogenes U2AF-65 in HeLa-Zellen an diesen Resten hydroxyliert ist. Damit haben wir zum ersten Mal eine Lysinhydroxylierung an nicht-sezernierten Proteinen beschrieben. Unsere Beobachtung, dass die Herunterregulation von Jmjd6 einen Einfluss auf das alternative Spleißen von Reportergenen hat, lässt sich mit seiner Funktion als U2AF-65 modifizierendes Enzym vereinbaren. Außerdem vermuten wir nun einen Zusammenhang zwischen der Aktivität von Jmjd6 und dem Spleißen, durch den wahrscheinlich der stark entwicklungsgeschädigte Phänotyp von Jmjd6 knockout Mäusen und knockdown Zebrafischen (reviewed in (Wolf et al., 2007)) erklärt werden könnte. Mit diesem Antrag wollen wir die Bedeutung der Lysin-5-Hydroxylierung von Kernproteinen für das Spleißen von Pre-mRNAs weiter untersuchen. Zuerst wollen wir die Hydroxylierung von U2AF-65 mithilfe von SILAC-Experimenten unter verschiedenen Bedingungen quantifizieren. Anschließend wollen wir Spleißeosomen isolieren und in einem proteomischen Ansatz feststellen, welche anderen Proteine dort von Jmjd6 an Lysinresten hydroxyliert vorliegen. Drittens wollen wir Spleißvarianten detektierende Mikroarrays durchführen und untersuchen, welche Gene ihr Spleißen verändern, wenn Jmjd6 fehlt oder überexprimiert wird. Zuletzt wollen wir den Mechanismus untersuchen, durch den die Hydroxylierung von Spleißfaktoren das Spleißen verändert.