Rolle der vakuolären SNAREs bei der homotypischen Fusion von Hefevakuolen

Die genetischen Arbeiten ber den protein transport zwischen Endosom und Vakuole in der Bäckerhefe酿酒酵母haben Die Charakterisierung von VPS（液泡蛋白分选）Genen ermöglicht， Die in ber 40补体组fallen。Während deren Funktionsort and die wehselwirkung mit anderen Proteinen teilwise benant sind, blet behden meisten Proteinen die funktionwise weitestgehend unklar。在研究项目中，研究人员在体外系统中研究了细菌的转运机制。大足sollen蛋白在体内的特异性标记，die das Endosom在体内的特异性标记，以及每个Kontakt der vakuolären蛋白酶Pep4p的特异性标记。vergrößerten内泌体中Klasse E vps - mutantten， die den Transport aus dem Endosom blockieren, akkumulienen protein。蛋白质在野生型zellen和Klasse E中突变基因的表达，以及在不受影响的情况下的Lokalisierung和iren Transport。研究结果表明：体外系统sollen Vakuolen和Endosomen as verschiedenenmodifizierten Stämmen verschieden和die Prozessierung der Fusionsproteine verfoltwerden。[3][6][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][3]。

Die genetischen Arbeiten über den Proteintransport zwischen Endosom und Vakuole in der Bäckerhefe Saccharomyces cervisiae haben die Charakterisierung von VPS (vacuole protein sorting) Genen ermöglicht, die in über 40 Komplementation-Gruppen fallen. Während deren Funktionsort und die Wechselwirkung mit anderen Proteinen teilweise bekannt sind, bleibt bei den meisten Proteinen die Funktionsweise weitestgehend unklar. Im Rahmen dieses Projekts soll dieser Transportschritt in einem zellfreien in vitro System nachvollzogen werden. Dazu sollen Fusionsproteine hergestellt werden, die das Endosom in vivo spezifisch markieren und erst nach Kontakt mit der vakuolären Protease Pep4p prozessiert werden sollen. Klasse E Vps-Mutanten, die den Transport aus dem Endosom blockieren, akkumulieren Proteine in vergrößerten Endosomen. Die Fusionsproteine sollen in WildtypZellen und in Klasse E Mutanten genetisch auf ihre Lokalisierung und ihren Transport hin untersucht werden. Für das in vitro System sollen Vakuolen und Endosomen aus verschiedenen modifizierten Stämmen aufgereinigt und die Prozessierung der Fusionsproteine verfolgt werden. Im Rahmen dieser Arbeiten sollen die molekularen Grundlagen des Endosomen-Vakuolentransports detailliert in vitro charakterisiert werden.