Klonierung der Sialat-8-O-Methyltransferase aus dem Seestern Asterias rubens

8-O-Methylierung stelt eine ungewöhnliche，soweit bekannt努尔auf den Seedlebeschränkte enzymatische Derivatierung der Sialinsäuren dar. Sialat-8-O-甲基转移酶是一种S-腺苷甲硫氨酸-和Mn 2 +-结合酶，由红色海盘车产生并具有特征。In dem beantragten Vorhaben soll die für dieses Enzym kodierende cDNA克隆和测序韦尔登。Hierfür soll zuerst genügend Methyltransferase isoliert韦尔登，um eine Teilsequenzierung von Peptiden zu ermöglichen.这些信息将被送到一个探测器上，然后被送到一个与8-O-甲基转移酶相关的cDNA文库中。通过DNA测序和重组表达，可将潜在的克隆韦尔登用于基因识别。Anhand der abgeleiteten Aminosäureseqzenz sollen durch Vergleiche mit anderen Methyltransferasen funktionell wichtige Primärstrukturbereiche identifiziert韦尔登。该组合酶可用于8-O-甲基唾液酸的生物化学和生物合成。

Die 8-O-Methylierung stellt eine ungewöhnliche, soweit bekannt nur auf den Seestern beschränkte enzymatische Derivatisierung der Sialinsäuren dar. Die Sialat-8-O-Methyltransferase, ein S-Adenosylmethionin- und Mn2+-abhängiges Enzym, wurde in dieser Arbeitsgruppe aus dem Seestern Asterias rubens gereinigt und charakterisiert. In dem beantragten Vorhaben soll die für dieses Enzym kodierende cDNA kloniert und sequenziert werden. Hierfür soll zuerst genügend Methyltransferase isoliert werden, um eine Teilsequenzierung von Peptiden zu ermöglichen. Die gewonnene Information wird zur Herstellung einer Sonde verwendet, die zur Durchsuchung einer cDNA-Bibliothek nach 8-O-Methyltransferase-kodierenden cDNA-Klonen eingesetzt wird. Potentielle Klone werden durch DNA-Sequenzierung und rekombinante Expression in geeigneten Wirtszellen identifiziert. Anhand der abgeleiteten Aminosäureseqzenz sollen durch Vergleiche mit anderen Methyltransferasen funktionell wichtige Primärstrukturbereiche identifiziert werden. Das rekombinante Enzym soll eingehend untersucht werden, um weitere Einblicke in die Biochemie und die Biosynthese von 8-O-methylierten Sialinsäuren zu gewinnen.