Untersuchungen zur Koppelung von Muscarinrzeptoren an G-Proteine und Suche nach Muscarinrezeptorliganden mit Hilfe von Hefezellen

不同的Muskarinrezeptor亚型（M1-M5）可通过不同的模型来选择性地识别Rezeptor/G蛋白-Kopplung和新的Muskarinrezeptor-Liganden。Hierzu soll Hefe-Expressiontechnologie eingesetzt韦尔登，die Anwendung umfangreicher genetischer Screeningtechniken erlaubt; dies ist in Säugetierzellen nicht möglich. Im einzelnen ist geplant，kürzlich entwickelte，Muskarinrezeptor-explosionerende Hefezellstämme zu benutzen，die努尔bei aktivierter Rezeptor/G-Protein-Kopplung wachsen.在Hefezellen实验韦尔登的一个第一个Schritt sollen多功能Muskarinrezeptoren图书馆（通过Zufallsmutagenese获得）中，G-蛋白a -Untereinheiten实验被验证。这些发现是孤立的Muskarinrezeptor-Mutanten，即G-蛋白质中的中性特征。Eine Sequenz-Analysis dieser mutierten Rezeptoren soll helfen，die molekularen Strukturen zu definieren，die für die Selektivität der Rezeptor/G-Protein-Kopplung entscheidend sind.在一个第二次实验中，Schritt sollen die Muskarinrezeptor-examerenden Hefezellstämme with Peptid-Bibliotheken，die für Zufallspeptide kodieren，transformiert韦尔登;这个实验系统将如此gewählt，daydad die entsprechenden Peptide sezerniert韦尔登。当一种Hefezellstämme仅被激活的Rezeptor/G蛋白-Kopplung wachsen，韦尔登仅被选择性地激活，该肽具有明显的激动剂活性。这是一个很好的例子，因为这种中性肽分离韦尔登，选择特定的Muskarinrezeptor-Subtypen aktivieren。Dies ist ohne Zweifel von hoher therapeutischer Relevanz，da es bisher keine Subtyp-selektiven muskarinische Liganden gibt; darüberhinaus wären solche Liganden von grosser Bedutung für die Untersuchung der physiologischen Aufgaben der einzelnen Muskarinrezeptor-Subtypen.

Diverse Muskarinrezeptor-Subtypen (M1-M5) sollen als Modell dienen, um auf struktureller Ebene die Selektivität der Rezeptor/G-Protein-Kopplung zu untersuchen und um neue Muskarinrezeptor-Liganden zu identifizieren. Hierzu soll Hefe-Expressionstechnologie eingesetzt werden, die die Anwendung umfangreicher genetischer Screeningtechniken erlaubt; dies ist in Säugetierzellen nicht möglich. Im einzelnen ist geplant, kürzlich entwickelte, Muskarinrezeptor-exprimierende Hefezellstämme zu benutzen, die nur bei aktivierter Rezeptor/G-Protein-Kopplung wachsen. In einem ersten Schritt sollen Bibliotheken mutierter Muskarinrezeptoren (gebildet durch Zufallsmutagenese) in Hefezellen exprimiert werden, die verschiedene G-Protein a -Untereinheiten exprimieren. Ziel dieser Untersuchungen ist es Muskarinrezeptor-Mutanten zu isolieren, die neuartige Eigenschaften in der G-Proteinkopplung aufweisen. Eine Sequenz-Analyse dieser mutierten Rezeptoren soll helfen, die molekularen Strukturen zu definieren, die für die Selektivität der Rezeptor/G-Protein-Kopplung entscheidend sind. In einem zweiten Schritt sollen die Muskarinrezeptor-exprimierenden Hefezellstämme mit Peptid-Bibliotheken, die für Zufallspeptide kodieren, transformiert werden; das experimentelle System wird so gewählt, daß die entsprechenden Peptide sezerniert werden. Da die eingesetzten Hefezellstämme nur bei aktivierter Rezeptor/GProtein-Kopplung wachsen, werden nur solche Klone wachsen, die Peptide mit agonistischer Aktivität sezernieren. Es scheint wahrscheinlich, daß auf diese Weise neuartige Peptide isoliert werden, die selektiv spezifische Muskarinrezeptor-Subtypen aktivieren können. Dies ist ohne Zweifel von hoher therapeutischer Relevanz, da es bisher keine Subtyp-selektiven muskarinische Liganden gibt; darüberhinaus wären solche Liganden von grosser Bedeutung für die Untersuchung der physiologischen Aufgaben der einzelnen Muskarinrezeptor-Subtypen.