Local elektrochemical detection of the hybridisation of complementary oligonucleotides on micro-structured surfaces

Nben der Reproduzierbarkeit der Herstellung and der weiteren Miniaturisierung kommt der Entwickung von DNA-Chip der Detektion der lokalen杂交von Fragmenten von Fragmenten oberflächengebundener einsträngier Sonden-DNA MIT Target-DNA Aus der Probe die entschedende Technologische be dedeutung zu.我是Rahman Dieses Projektes soll ein Neues，电气化学公司一直在进行DNA芯片的杂交。我是Beschriebenen optischen and Electric Chemischen Methoden Soll De Detektion ohne Markierung der Sonden-Order Target-DNA erfolgen。标签自由检测方法基本自动调制和Glektronentansferkintik einer einer与Glektronentansferkintik einer redoxSpezes一个einer abstoüungskräften gegen nten甚至Ladungen von Phocatgruppe Im Rück grat der auf der Chipoberfläche fixierten DNA-Stränge。这两个项目分别是：两个项目，一个是原位杂交，一个是杂交性项目，另一个是平行项目，也就是两个平行的项目。同时进行DNA-DNA扩增，同时进行SECM soll-letztlich zur检测和von单核细胞多态(SNP)基因检测。

Neben der Reproduzierbarkeit der Herstellung und der weiteren Miniaturisierung kommt bei der Entwicklung von DNA-Chips der Detektion der lokalen Hybridisierung von Fragmenten oberflächengebundener einsträngiger Sonden-DNA mit Target-DNA aus der Probe die entscheidende technologische Bedeutung zu. Im Rahmen dieses Projektes soll ein neues, elektrochemisches Ausleseverfahren für Hybridisierungsereignisse auf DNA-Chips entwickelt werden. Im Gegensatz zu bislang beschriebenen optischen und elektrochemischen Methoden soll die Detektion ohne Markierung der Sonden- oder Target-DNA erfolgen. Die labelfreie Detektionsmethode basiert auf der Modulation der Elektronentransferkinetik einer negativ geladenen Redoxspezies an einer Basiselektrode infolge von Abstoßungskräften gegenüber negativen Ladungen von Phosphatgruppe im Rückgrat der auf der Chipoberfläche fixierten DNA-Stränge. Fernziel des Projektes ist es, Hybridisierungsreaktionen in-situ und mit hoher Ortsauflösung auf dem Chip zu verfolgen, Missmatches aufzuklären und parallel mittels oberflächengebundener Oligonukleotidbibliotheken-Proben hinsichtlich der Präsenz spezifischer DNA-Sequenzen mit hoher Sensitivität zu untersuchen. Dazu müssen einzelsträngige DNA-Fragmente in kontrollierter Weise über die Wahl einer geeigneten Bindungschemie kovalent an mit selbstorganisierenden Thiol-Monoschichten modifizierten Goldoberflächen angebunden werden, wobei unspezifische Adsorption minimiert oder der Einfluss der Oberflächenkonzentration der Oligonukleotide evaluiert werden sollen. Die mikrostrukturierte Deposition verschiedener Oligonukleotide soll durch Piezodispensing, Mikrospotting oder auch durch die Verwendung der elektrochemischen Nahfeldmikroskopie erfolgen. Die Modulation der Regeneration einer Redoxspezies an der Basiselektrode soll mittels hochauflösender elektrochemischer Rastermikroskopie (SECM) überprüft und visualisiert werden. Eine langsame in-situ-Temperaturerhöhung bis zum Schmelzpunkt der gebildeten DNA-Doppelstränge unter simultanen Beobachtung der modifizierten Oberflächenbereiche mittels SECM soll letztlich zur Detektion von Missmatches und von Single-Nukleotid-Polymorphism (SNP) herangezogen werden.