Optimiertes ß-Faltblattmodul für die effektive Expression von Fab-Fragmenten in E.coli

本项目通过在恒定的荧光标记区域中局部随机定位法对Zufallsmutationen进行筛选，筛选出一种Fab片段，该Fab片段具有选择性地选择于外膜周浆体中的可变噬菌体显示氨基定位法，以用于最佳荧光标记，Bedeutung sind.Als Modell sollen die variablen Regionen des murinen anti-p24（HIV-1）Antikörpers CB 4 -1 in Verbindung mit partiell randomisierten bzw.多人和多人的家庭都被韦尔登。选择CB 4 -1表位肽的靶点。为了选择合适的Fab-变异体，我们进行了韦尔登参数分析：表达蛋白、表位肽亲和性、Faltungskinetik、稳定性和结构参数，并将结构特征与Faltungsverhalten和Gesamtstabilität之间的相互作用进行了比较。DALKING Combination der optimierten constanten Domänen mit weiteren variablen Domänen unterscheedlicher Spezifität soll die generelle Verwendbarkeit solcher-Faltblattmodule für die Expressionsoptimierung von Fab-Fragmenten untersucht韦尔登.

Das vorliegende Projekt hat zum Ziel, durch die Erzeugung von Zufallsmutationen sowie durch lokale Randomisierungen spezieller Positionen in den konstanten ß -Faltblatt-Domänen der leichten und schweren Kette eines Fab-Fragments mit anschließender Selektion von im Periplasma bevorzugt exprimierten Varianten mittels Phage-Display Aminosäurepositionen zu identifizieren, die für eine optimale Faltung, Stabilität und Ausbeute des kompletten Fragments vonBedeutung sind.Als Modell sollen die variablen Regionen des murinen anti-p24 (HIV-1) Antikörpers CB4-1 in Verbindung mit partiell randomisierten bzw. mutierten murinen und humanen konstanten Domänen verwendet werden. Als Target für die Selektion dient das Epitoppeptid des CB4-1. Für selektierte Fab-Varianten dieses Antikörpers sollen folgende Parameter analysiert werden: Proteinausbeute der Expression, Affinität zum Epitoppeptid, Faltungskinetik, Stabilität und strukturelle Parameter, wobei die strukturelle Charakterisierung Aufschluß über die Bedeutung lokaler Interaktionen auf das Faltungsverhalten und die Gesamtstabilität des ß -Faltblatts geben soll. Durch Kombination der optimierten konstanten Domänen mit weiteren variablen Domänen unterschiedlicher Spezifität soll die generelle Verwendbarkeit solcher ß -Faltblattmodule für die Expressionsoptimierung von Fab-Fragmenten untersucht werden.