Structural analysis of the anti-myc tag antibody 9E10 in complex with the c-myc epitope and the mutagenesis of the binding region for the characterization and optimization of the interaction

对与 c-myc 表位复合的抗 myc 标签抗体 9E10 进行结构分析，并对结合区域进行诱变，以表征和优化相互作用

• 批准号: 5355839
• 负责人: Professor Dr. Wolfgang Höhne
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Biochemie (CCM)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2004-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5355839?language=en
• 关键词: Structural; analysis; anti; myc; tag

Der monoklonale murine anti-myc-tag Antikörper 9E10 erfährt eine breite Anwendung als Detektionsantikörper und für die Affinitätsreinigung von rekombinant exprimierten, mit einem entsprechenden Fusionspeptid, dem myc-tag, versehenen Proteinen. Zur Untersuchung der strukturellen Grundlagen der Wechselwirkung dieses Antikörpers mit seinem Peptidepitop soll am Komplexen des entsprechenden Fab-Fragments mit Peptid und an freiem Fab-Fragment eine Röntgenkristallstrukturanalyse durchgeführt werden. Aus einem Vergleich der bereits erfolgten Epitopcharakterisierung durch komplette Substitutionsanalysen mit den zu erhaltenden Kristallstrukturen werden Informationen zur strukturellen Bedeutung der Schlüsselpositionen im speziellen und zur Antikörper/Peptid-Wechselwirkung im allgemeinen erwartet, wobei in der Antikörper-Bindungsregion ein besonderes Interesse der Konformation der ungewöhnlich langen CDR3H gilt. Mit ortsspezifischen Mutagenesen im Bindungsbereich des Antikörpers sollen zwei Ziele verfolgt werden: 1. Untersuchung zu Prinzipien der Affinitätsreifung von Antikörpern durch schrittweise Rückmutation auf die Keimbahngensequenz und 2. Optimierung der Affinität zu modifizierten Epitopvarianten, speziell einem verkürzten und einem durch Einführung eines Proteaseschnittorts veränderten myc-tag auf der Grundlage von statistischen und wissensbasierten Mutationen im Bindungsbereich, letzteres auf der Grundlage der gelösten Kristallstruktur. Die Aussagen aus Struktur und Mutagenesedaten sollen durch thermodynamische Daten ergänzt werden.

Der monoklonale murine anti-myc-tag Antikörper 9E10 erfährt eine breite Anwendung als Detektionsantikörper und für die Affinitätsreinigung von rekombinant experimenten，mit einem entsprechenden Fusionspeptid，dem myc-tag，versehenen Proteinen.通过韦尔登分析，对含有肽的游离Fab片段和含有肽的游离Fab片段的复合物进行结构基础研究。通过复杂的替代分析，结合韦尔登信息，对特定范围内的Schlüsselpositionen结构进行分析，并对所有的Antikörper/Peptid-Wechselectin进行分析，可以对Antikörper-Bindungsregion中的CDR 3 H镀金层的结构进行分析。Mit ortsspezifischen Mutagenesen im Bindungsbereich des Antikörpers sollen zwei Ziele verfolgt韦尔登：1. Untersuchung zu Prinzipien der Affinitätsreifung von Antikörpern durch schrittweise Rückmutation auf die Keimbahngensequenz und 2.优化亲和性以修饰表位变量，通过蛋白质酶切酶在结合位点的统计学基础和基于突变的知识基础上对myc-tag进行修饰，从而使蛋白质酶切酶在凝胶晶体结构基础上进行修饰。结构和突变的Aussagen sollen durch durch Daten ergänzt韦尔登。