Human Cells and Tissues Core: 3D Models of Engineered Human iPS Cells to Investigate Neurotropic Virus Infections

麻省理工学院全球人类组织和传染病模型研究中心(MIT.HTMID)将研究这五种疾病中的病毒感染。 神经干细胞的类型是指它们是从人类胚胎干细胞(ES)分化而来的，或者是人类诱导的胚胎干细胞。 多能干细胞(IPS)。此外，MIT.HTMID的研究小组将致力于解决人类三种疾病的病毒感染问题。 三维立体(3D)脑组织器官有助于进一步了解寨卡病毒和小头畸形症。所有的细胞和组织都在工作。 该中心的核心研究中心的工作将得到全球人类细胞和组织研究中心核心设施的支持。该中心的核心中心将提供支持。 总部设在伦敦怀特黑德研究所的和将为HT.MID和研究人员提供持续的干细胞供应。 项目。为了更好地准备细胞和从多能干细胞中提取有机类物质，我们将​的成纤维细胞重新编程为多能细胞。 IPS是细胞。接下来，将第一个多能的​神经干细胞分化为多能神经前体细胞(NPs)。 星形胶质细胞和少突胶质细胞是从NPs中分化而来的。它可以产生一个完全同质的NPs群体。 基于Smad-抑制的神经细胞分化方案通常被常规使用。他们坚持的是基因控制基因和突变体的文化。 ESC/IPSCs将被进一步分化为神经花环，表达Pax6基因和Nestin基因。 免疫荧光、免疫反应和免疫反应进一步扩大，因为神经元祖细胞参与了碱性成纤维细胞生长因子的存在。*M​全能核蛋白。 它们被分化成神经元。通过​来产生新的神经元，这些NPs在一种新的生长因子和耗尽的介质中被培养。 促进一个混合的神经元群体的终末细胞分化和成熟过程。 根据在多电极阵列上的测量，电生理上是非常活跃的。​多能神经前体细胞是。 分别将其分化为少突胶质细胞或少突胶质细胞​。为了从更多的人类NPs中分离出更多的星形胶质细胞，我们已经有了。 制定了新的协议，允许生产高度同质的生物种群。具体地说，就是FACS-分类。 PSAncam？​/A2B5​是从多个NP衍生而来的胶质细胞前体细胞，随着EGF和A2B5的进一步存在，这些细胞的数量也得到了扩大。 +​ 从S100B+星形胶质细胞中衍生出未成熟的星形胶质细胞。使这一FACS分选的群体进一步成熟，特别是在人类的存在基础上。 CNTF，可产生GFAP+​的星形胶质细胞。许多星形胶质细胞可通过磁性干细胞分选系统(MACs)进行分选，以获得高纯度。 CD44是微球。为了更好地生成少突胶质细胞，A2B5+​和神经胶质前体细胞将在碱性成纤维细胞生长因子和成骨细胞集落刺激因子中得到扩增。 α、CD140a、CD140a、CD140 前体逐渐成熟，形成MBP+​ 少突胶质细胞在生长、因子去除和暴露后恢复正常甲状腺功能。 荷尔蒙和T3.在这个项目中，调查人员和他们的核心工作人员将定期会面，以制定计划和工作流程，并预测细胞。 第一和第二个项目的需求。人类细胞和组织的核心部分将成为整个计划的一个组成部分和必不可少的一部分。 MIT.HTMID项目中心及其项目产出计划将进一步增强该项目取得成功的潜力。

The MIT Center for Human Tissue Models of Infectious Diseases (MIT.HTMID) will study viral infections of five  types of neural cells that are differentiated from human embryonic stem (ES) cells or human induced  pluripotent stem (iPS) cells. In addition, MIT.HTMID research will address viral infections of human three  dimensional (3D) cerebral organoids toward understanding Zika virus microcephaly. All cell work and tissue  work for the Center’s research will be supported by the Human Cells and Tissues Core facility. The Core will  be located at the Whitehead Institute, and will provide a continuous supply of cells for both HT.MID research  projects. To prepare cells and organoids from iPS cells, h​uman fibroblasts are reprogrammed into pluripotent  iPS cells. Next, the pluripotent iPS cells are differentiated into multipotent neural progenitors (NPs).  ​Neurons,  astrocytes and oligodendrocyte are differentiated from NPs. To generate a homogenous population of NPs, a  SMAD­inhibition­based neural differentiation protocol is routinely used. Adherent cultures of control and mutant  ESCs/iPSCs will be differentiated into neural rosettes expressing Pax6 and Nestin as detected by  immunofluorescence, and further expanded as neuronal progenitors in the presence of bFGF.  M​ultipotent NPs  are differentiated into neurons. ​To generate neurons, NPs are cultured in a growth factor depleted medium that  promotes terminal differentiation and maturation of a mixed populations of neurons. These neurons are  electrophysiologically active, as measured on multi­electrode arrays.  ​Multipotent neural progenitors are  separately differentiated into astrocytes or oligodendrocytes​. To derive astrocytes from human NPs, we have  developed protocols that allow the production of highly homogeneous populations. Specifically, FACS­sorted  PSA­NCAM­​/A2B5​ glial progenitors, derived from NPs, are expanded in the presence of EGF and bFGF to  +​ derive S100b+ immature astrocytes. Further maturation of this FACS­sorted population, in the presence of  CNTF, yields GFAP+​ astrocytes. The cells can be sorted to high purity by magnetic cell sorting (MACS) against  CD44 microbeads. To generate oligodendrocytes, A2B5+​ glial progenitors will be expanded in bFGF and  PDGFα, and further sorted by MACS against O4 and CD140a markers. These fated oligodendrocyte  precursors are matured into MBP+​  oligodendrocytes after growth factor removal and exposure to the thyroid  hormone T3. The project investigators and core staff will meet regularly to plan work flow and anticipate cell  needs for Projects 1 and 2. The Human Cells and Tissues core will be an integral and essential part of the  MIT.HTMID Center, and its output will enhance the project’s potential for success