Recherche d'enzymes thermophiles d'intérêt industriel par une approche métagénomique

这些酶在不同的行业中被用于替代有害的化学产品。为了提高竞争力和产品质量，这些行业需要寻找新的酶和功效，以及更大的活性。由于提供了微生物通用酶，因此采用了传统的微生物纯培养分离方法，以分离出部分产酶微生物。然而，只有1%的微生物存在于纯培养的实验室中，99%的酶存在于自然界中。这个问题可以用数学方法来解决。在此过程中，所有的鸡胚培养物都可以在实验室培养的细菌中进行克隆。在这种情况下，形成了一种包含百万克隆的“混合物”，这种混合物包含了香石竹微花的一般材料。此外，这些克隆对于鉴定含有工业酶基因编码的细胞来说是非常重要的。 本项目利用donc la metagénomique pour trouver de nouvelles enzymes de type protéase，lipase et glycohydrolases démontrant，entre autres，une bonne thermostabilité. La microflore qui sert de source de gènes sera obtenue par un enrichissement en bioréacillaérobies thermophiles（55-70°C）recevant divers substrats d'intérêt（extrait de viande，huile，chitine，etc.）.从生物活性物质复合物中提取ADN和在E.大肠杆菌、假单胞菌属、链霉菌属和芽孢杆菌属。采用两种机器人滤片策略，通过对96个样本和荧光底物进行酶促试验和基因检测，在深ADN上进行杂交。这些阳性克隆是典型的和连续的，而这些更感兴趣的克隆是在表达载体中的。这些酶是在工业条件下发酵和检测的。

Les enzymes sont utilisées dans diverses industries pour remplacer des produits chimiques agressifs nuisibles à l'environnement. Pour rester compétitives et améliorer leurs produits, les industries doivent trouver de nouvelles enzymes plus efficaces, plus résistantes et avec un spectre d'activité plus large. Comme ces enzymes proviennent généralement de micro-organismes, leur découverte passe traditionnellement par l'isolation en culture pure de micro-organismes producteurs à partir d'échantillons environnementaux. Cependant, puisque seul 1% des micro-organismes existants peuvent ainsi être obtenus en laboratoire en culture pure, 99% des enzymes présents dans la nature échappent à cette méthode. La métagénomique permet de contourner ce problème. Dans cette approche, tout l'ADN d'un échantillon environnemental est extrait et cloné dans une bactérie cultivable en laboratoire. On forme donc une « métagénothèque » contenant des milliers de clones dans lesquels est réparti le matériel génétique de la microflore de l'échantillon. Ensuite, ces clones sont criblés pour identifier ceux qui contiennent des gènes codant pour des enzymes d'intérêt industriel.       Le présent projet utilise donc la métagénomique pour trouver de nouvelles enzymes de type protéase, lipase et glycohydrolases démontrant, entre autres, une bonne thermostabilité. La microflore qui sert de source de gènes sera obtenue par un enrichissement en bioréacteurs aérobies thermophiles (55-70°C) recevant divers substrats d'intérêt (extrait de viande, huile, chitine, etc.). La métagénothèque sera formée par l'extraction de l'ADN d'un échantillon composite provenant des bioréacteurs et par le clonage de cet ADN dans un vecteur navette capable d'être utilisé par E. coli, Pseudomonas, Streptomyces et Bacillus. Deux stratégies de criblage robotisé seront utilisées, soit par hybridation sur puce d'ADN avec des sondes visant des gènes d'intérêt et par tests enzymatiques à l'aide de plaques de 96 puits et de substrats fluorogéniques. Les clones positifs seront caractérisés et séquencés, et les plus intéressants seront clonés dans des vecteurs d'expression. Les enzymes seront ensuite produites en fermenteur et testées en conditions industrielles.