The bacterial two-hybrid system as a reporter system for analyzing protein-protein interactions.
The bacterial two-hybrid system as a reporter system for analyzing protein-protein interactions.
复制标题
细菌双杂交系统作为分析蛋白质-蛋白质相互作用的报告系统。
DOI：
10.1101/pdb.prot4672
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发表时间：
2007
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Joung,JKeith
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Giesecke,AstridV;Joung,JKeith
方法为了测试蛋白X和Y的相互作用，首先决定使用哪种DBD和RNAP亚基来制备杂交蛋白（见表3和表4）。此外，还应确保编码两种杂合蛋白质的质粒具有相容的复制起点以及不同的耐药性基因。相容的复制起点确保两个融合蛋白编码质粒都将稳定地维持在细菌细胞中。最后，这些质粒的抗生素抗性也必须与将要使用的细菌菌株相容。为了避免与杂合蛋白表达相关的潜在毒性问题，pDBD-X和pRNAP-Y应在表达lacI q的菌株（例如，XL 1-Blue）中繁殖。
METHODTo test the interaction of proteins X and Y, first decide which DBD and RNAP subunit to use for making hybrid proteins (see Table 3 and Table 4). In addition, one should also ensure that the plasmids encoding the two hybrid proteins possess compatible origins of replication, as well as different antibiotic-resistance genes. Compatible origins of replication ensure that the two fusion protein-encoding plasmids will both be stably maintained in the bacterial cells. Finally, the antibiotic resistance of these plasmids must also be compatible with the bacterial strain that will be used. To avoid potential toxicity problems associated with expression of the hybrid protein, pDBD-X and pRNAP-Y should be propagated in strains expressing lacI q (eg, XL1-Blue).
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