Rapid Construction of Complex Plant RNA Virus Infectious cDNA Clones for Agroinfection Using a Yeast-E. coli-Agrobacterium Shuttle Vector.
Rapid Construction of Complex Plant RNA Virus Infectious cDNA Clones for Agroinfection Using a Yeast-E. coli-Agrobacterium Shuttle Vector.
复制标题
使用酵母-大肠杆菌-农杆菌穿梭载体快速构建用于农杆菌感染的复杂植物 RNA 病毒感染性 cDNA 克隆
DOI：
10.3390/v9110332
复制
发表时间：
2017-11-07
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Li Z
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sun K;Zhao D;Liu Y;Huang C;Zhang W;Li Z
感染性全长克隆的获得对于病毒生物学、病理学的反向遗传学研究和病毒载体的构建是必不可少的。然而，对于具有大基因组大小的RNA病毒或表现出固有克隆困难的RNA病毒，产生生物活性互补DNA（cDNA）克隆的程序可能是耗时的或技术上具有挑战性的。在这里，我们已经构建了一个酵母-大肠杆菌-农杆菌穿梭载体，能够在酵母中进行高效同源重组，用于农杆菌相容性植物病毒克隆的组装。使用这个载体，我们表明，感染的cDNA克隆的植物负链RNA病毒，苦苣菜黄网弹状病毒，可以快速组装。此外，马铃薯Y病毒感染性克隆在酵母中的一步装配，无论有或没有内含子，很容易实现从多达8个重叠的DNA片段。更重要的是，回收的酵母质粒可以直接转化农杆菌进行接种，从而避免了E。大肠杆菌克隆步骤和相关的毒性问题。这种方法是快速，高效和成本效益，应该很容易适用于广泛的植物病毒。
The availability of infectious full-length clone is indispensable for reverse genetics studies of virus biology, pathology and construction of viral vectors. However, for RNA viruses with large genome sizes or those exhibiting inherent cloning difficulties, procedure to generate biologically active complementary DNA (cDNA) clones can be time-consuming or technically challenging. Here we have constructed a yeast-Escherichia coli-Agrobacterium shuttle vector that enables highly efficient homologous recombination in yeast for assembly of Agrobacterium compatible plant virus clones. Using this vector, we show that infectious cDNA clones of a plant negative-stranded RNA virus, sonchus yellow net rhabdovirus, can be rapidly assembled. In addition, one-step assembly of infectious clones of potato virus Y in yeast, either with or without intron, was readily achieved from as many as eight overlapping DNA fragments. More importantly, the recovered yeast plasmids can be transformed directly into Agrobacterium for inoculation, thereby obviating the E. coli cloning steps and associated toxicity issues. This method is rapid, highly efficient and cost-effective and should be readily applicable to a broad range of plant viruses.
登录
查看更多内容
影响因子：
1.6
作者：
Kouprina N;Larionov V
通讯作者：
Larionov V
DOI：
10.1073/pnas.93.22.12400
发表时间：
1996-10-29
影响因子：
11.1
作者：
Johansen, IE
通讯作者：
Johansen, IE
DOI：
10.1073/pnas.83.10.3282
发表时间：
1986-05-01
影响因子：
11.1
作者：
GRIMSLEY, N;HOHN, B;WALDEN, R
通讯作者：
WALDEN, R
影响因子：
2.7
作者：
Ali, M. Chikh;Omar, A. Said;Natsuaki, T.
通讯作者：
Natsuaki, T.
影响因子：
5
作者：
Bukovinszki, Agnes;Goetz, Reinhard;Balazs, Ervin
通讯作者：
Balazs, Ervin