A super-sensitive auxin-inducible degron system with an engineered auxin-TIR1 pair.
A super-sensitive auxin-inducible degron system with an engineered auxin-TIR1 pair.
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DOI：
10.1093/nar/gkaa748
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发表时间：
2020-10-09
影响因子：
14.9
通讯作者：
Fukagawa T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nishimura K;Yamada R;Hagihara S;Iwasaki R;Uchida N;Kamura T;Takahashi K;Torii KU;Fukagawa T
生长素诱导降解决定子（AID）系统能够通过应用天然生长素IAA快速消耗细胞内的靶蛋白。AID系统可用于研究必需蛋白质的生理功能;然而，该系统通常需要高剂量的生长素来实现脊椎动物细胞中的有效去除。在这里，我们描述了一个超敏感的AID系统，该系统采用了合成的生长素衍生物5-Ad-IAA及其高亲和力结合伙伴OsTIR 1F 74 A。超灵敏的AID系统能够使鸡DT 40细胞中的AID诱导剂浓度降低1000倍以上。为了将该系统应用于各种哺乳动物细胞系，包括含有多组染色体的癌细胞，我们利用了一种单步方法，其中基于CRISPR/Cas9的基因敲除与pAID质粒的插入相结合。一步法结合超灵敏的AID系统使我们能够在广泛的脊椎动物细胞系中轻松快速地产生基于AID的条件性敲除细胞。我们的方法结合了超灵敏的AID系统和一步法，为阐明必需基因的作用提供了一个强有力的工具。
The auxin-inducible degron (AID) system enables rapid depletion of target proteins within the cell by applying the natural auxin IAA. The AID system is useful for investigating the physiological functions of essential proteins; however, this system generally requires high dose of auxin to achieve effective depletion in vertebrate cells. Here, we describe a super-sensitive AID system that incorporates the synthetic auxin derivative 5-Ad-IAA and its high-affinity-binding partner OsTIR1F74A. The super-sensitive AID system enabled more than a 1000-fold reduction of the AID inducer concentrations in chicken DT40 cells. To apply this system to various mammalian cell lines including cancer cells containing multiple sets of chromosomes, we utilized a single-step method where CRISPR/Cas9-based gene knockout is combined with insertion of a pAID plasmid. The single-step method coupled with the super-sensitive AID system enables us to easily and rapidly generate AID-based conditional knockout cells in a wide range of vertebrate cell lines. Our improved method that incorporates the super-sensitive AID system and the single-step method provides a powerful tool for elucidating the roles of essential genes.
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影响因子：
64.5
作者：
Nora EP;Goloborodko A;Valton AL;Gibcus JH;Uebersohn A;Abdennur N;Dekker J;Mirny LA;Bruneau BG
通讯作者：
Bruneau BG
影响因子：
3.2
作者：
Tae, Hyun Seop;Sundberg, Thomas B.;Neklesa, Taavi K.;Noblin, Devin J.;Gustafson, Jeffrey L.;Roth, Anke G.;Raina, Kanak;Crews, Craig M.
通讯作者：
Crews, Craig M.
影响因子：
11.4
作者：
Fukagawa, T;Mikami, Y;Ikemura, T
通讯作者：
Ikemura, T
DOI：
10.1126/science.1232033
发表时间：
2013-02-15
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
通讯作者：
Church GM
影响因子：
16
作者：
Gong Y;de Lange T
通讯作者：
de Lange T