Target protein deglycosylation in living cells by a nanobody-fused split O-GlcNAcase.
Target protein deglycosylation in living cells by a nanobody-fused split O-GlcNAcase.
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DOI：
10.1038/s41589-021-00757-y
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发表时间：
2021-05
影响因子：
14.8
通讯作者：
Woo CM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ge Y;Ramirez DH;Yang B;D'Souza AK;Aonbangkhen C;Wong S;Woo CM
O-GlcNAc是一种重要的动态翻译后修饰，存在于数千种核质蛋白上。询问O-GlcNAc在单个靶蛋白上的作用是至关重要的，但在细胞中执行是具有挑战性的。在这里，我们开发了一种纳米体融合的裂解O-GlcNAcase(OGA)作为O-GlcNAc擦除剂，用于选择性地在细胞中对目标蛋白进行脱糖基化。经过系统的细胞优化，我们确定了一种具有降低固有脱糖苷酶活性的裂解OGA，该裂解OGA在纳米体的指导下选择性地从所需的目标蛋白中去除O-GlcNAc。我们展示了用四个纳米体针对五个靶蛋白构建的纳米体融合裂解OGA的通用性，并利用该系统研究了O-GlcNAc对转录因子c-jun和c-Fos的功能。纳米体导向的O-GlcNAc擦除器通过选择性地直接从细胞中的单个蛋白质中去除O-GlcNAc，为O-GlcNAc的功能评估和工程设计提供了新的策略。
O-GlcNAc is an essential and dynamic post-translational modification presented on thousands of nucleocytoplasmic proteins. Interrogating the role of O-GlcNAc on a single target protein is crucial yet challenging to perform in cells. Herein, we developed a nanobody-fused split O-GlcNAcase (OGA) as an O-GlcNAc eraser for selective deglycosylation of a target protein in cells. After systematic cellular optimization, we identified a split OGA with reduced inherent deglycosidase activity that selectively removed O-GlcNAc from the desired target protein when directed by a nanobody. We demonstrate the generality of the nanobody-fused split OGA using four nanobodies against five target proteins, and use the system to study functions for O-GlcNAc on the transcription factors c-Jun and c-Fos. The nanobody-directed O-GlcNAc eraser provides a new strategy for functional evaluation and engineering of O-GlcNAc via the selective removal of O-GlcNAc from individual proteins directly in cells.
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影响因子：
14.8
作者：
Koch B;Nijmeijer B;Kueblbeck M;Cai Y;Walther N;Ellenberg J
通讯作者：
Ellenberg J
影响因子：
4
作者：
Hess, J;Angel, P;Schorpp-Kistner, M
通讯作者：
Schorpp-Kistner, M
影响因子：
4
作者：
Kuey, Cansu;Larocque, Gabrielle;Royle, Stephen J.
通讯作者：
Royle, Stephen J.
DOI：
10.1073/pnas.1200425109
发表时间：
2012-05-08
影响因子：
11.1
作者：
Alfaro, Joshua F.;Gong, Cheng-Xin;Smith, Richard D.
通讯作者：
Smith, Richard D.
糖尿病和糖尿病并发症的蛋白O-Glcnacylation。
影响因子：
3.4
作者：
Ma J;Hart GW
通讯作者：
Hart GW