Preservation of large-scale chromatin structure in FISH experiments.
Preservation of large-scale chromatin structure in FISH experiments.
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在鱼类实验中保存大规模染色质结构。
DOI：
10.1007/s00412-006-0084-2
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发表时间：
2007-04
期刊：
影响因子：
1.6
通讯作者：
Dietzel, Steffen
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Hepperger, Claudia;Otten, Simone;von Hase, Johann;Dietzel, Steffen
特定内源染色质区域的核组织只能通过荧光原位杂交 (FISH) 来研究。通常采用两种固定程序之一：（1）缓冲甲醛或（2）用甲醇乙酸固定低渗休克，然后将细胞核滴在载玻片上并风干。在这项研究中，我们比较了这两种程序以及一些变化对核形态和 FISH 信号的影响。我们分析了小鼠红白血病和小鼠胚胎干细胞，因为它们的亚着丝粒异染色质簇提供了评估染色质保存的简单方法。定性和定量分析表明，甲醛固定可以很好地保存大规模染色质结构，而低渗处理后的经典甲醇乙酸固定会严重损害核形状，并导致染色体区域、异染色质结构和大型转基因阵列的破坏。我们的数据表明，此类制剂并不能忠实地反映体内核结构。补充材料可在本文的在线版本中找到：http://dx.doi.org/10.1007/s00412-006-0084-2，授权用户可以访问。
The nuclear organization of specific endogenous chromatin regions can be investigated only by fluorescence in situ hybridization (FISH). One of the two fixation procedures is typically applied: (1) buffered formaldehyde or (2) hypotonic shock with methanol acetic acid fixation followed by dropping of nuclei on glass slides and air drying. In this study, we compared the effects of these two procedures and some variations on nuclear morphology and on FISH signals. We analyzed mouse erythroleukemia and mouse embryonic stem cells because their clusters of subcentromeric heterochromatin provide an easy means to assess preservation of chromatin. Qualitative and quantitative analyses revealed that formaldehyde fixation provided good preservation of large-scale chromatin structures, while classical methanol acetic acid fixation after hypotonic treatment severely impaired nuclear shape and led to disruption of chromosome territories, heterochromatin structures, and large transgene arrays. Our data show that such preparations do not faithfully reflect in vivo nuclear architecture. Supplementary material is available in the online version of this article at http://dx.doi.org/10.1007/s00412-006-0084-2 and is accessible for authorized users.
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DOI：
10.1083/jcb.200207115
发表时间：
2002-12-09
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Mahy NL;Perry PE;Bickmore WA
通讯作者：
Bickmore WA
DOI：
10.1083/jcb.145.6.1119
发表时间：
1999-06-14
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Croft JA;Bridger JM;Boyle S;Perry P;Teague P;Bickmore WA
通讯作者：
Bickmore WA
DOI：
10.1101/sqb.1993.058.01.085
发表时间：
1993-01-01
期刊：
COLD SPRING HARBOR SYMPOSIA ON QUANTITATIVE BIOLOGY
影响因子：
--
作者：
CREMER, T;KURZ, A;LICHTER, P
通讯作者：
LICHTER, P
影响因子：
2.7
作者：
Cheng, G;Thompson, RP;Gourdie, RG
通讯作者：
Gourdie, RG
DOI：
10.1007/bf01003288
发表时间：
1981-01-01
期刊：
HISTOCHEMICAL JOURNAL
影响因子：
--
作者：
FRASCHINI, A;PELLICCIARI, C;ROMANINI, MGM
通讯作者：
ROMANINI, MGM