CRISPR/Cas9-mediated gene knock-down in post-mitotic neurons.
CRISPR/Cas9-mediated gene knock-down in post-mitotic neurons.
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有丝分裂后神经元中 CRISPR/Cas9 介导的基因敲除。
DOI：
10.1371/journal.pone.0105584
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Sabatini BL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Straub C;Granger AJ;Saulnier JL;Sabatini BL
原核适应性免疫系统CRISPR/Cas9最近已经适应于真核细胞中的基因组编辑。该技术允许在单个细胞的基因组DNA中序列特异性诱导双链断裂，有效地导致靶基因的敲除。因此，它有望成为神经科学中应用的理想候选者，其中组成性遗传修饰由于大脑的适应性变化而经常是致命的或无效的。在这里，我们使用CRISPR/Cas9在稀疏的小鼠锥体神经元群体中敲除Grin 1，Grin 1是编码强制性NMDA受体亚基蛋白GluN 1的基因。在这种遗传镶嵌组织中，操纵的细胞缺乏与靶基因的完全敲除一致的由NMDA型谷氨酸受体介导的突触电流。我们的研究结果首次证明了CRISPR/Cas9介导的体内神经元敲低的原理，它可以成为研究神经元回路中特定蛋白质功能的有用工具。
The prokaryotic adaptive immune system CRISPR/Cas9 has recently been adapted for genome editing in eukaryotic cells. This technique allows for sequence-specific induction of double-strand breaks in genomic DNA of individual cells, effectively resulting in knock-out of targeted genes. It thus promises to be an ideal candidate for application in neuroscience where constitutive genetic modifications are frequently either lethal or ineffective due to adaptive changes of the brain. Here we use CRISPR/Cas9 to knock-out Grin1, the gene encoding the obligatory NMDA receptor subunit protein GluN1, in a sparse population of mouse pyramidal neurons. Within this genetically mosaic tissue, manipulated cells lack synaptic current mediated by NMDA-type glutamate receptors consistent with complete knock-out of the targeted gene. Our results show the first proof-of-principle demonstration of CRISPR/Cas9-mediated knock-down in neurons in vivo, where it can be a useful tool to study the function of specific proteins in neuronal circuits.
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