OMIP 074: Phenotypic analysis of IgG and IgA subclasses on human B cells.
OMIP 074: Phenotypic analysis of IgG and IgA subclasses on human B cells.
复制标题
OMIP 074：人B细胞上IgG和伊加亚类的表型分析。
DOI：
10.1002/cyto.a.24341
复制
发表时间：
2021-09
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Mason RD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nettey L;Ballard R;Liechti T;Mason RD
2 背景抗体发现研究有助于促进癌症 [1]、自身免疫性疾病 [2] 和传染病（例如流感和人类免疫缺陷病毒 1 (HIV-1)[3, 4]）的治疗性单克隆抗体 (mAb) 的分离和表征。人抗体分离的方法包括 B 细胞永生化、酵母或噬菌体展示、单 B 细胞培养和抗原特异性单 B 细胞分选 [5]。后两种方法依赖于记忆 B 细胞的单细胞分选，通常采用转储/排除门去除污染 T 细胞 (CD3− CD4− CD8−)、单核细胞/巨噬细胞 (CD14−) 和死细胞（活力染料），并使用染色组来包括 B 细胞标记物 (CD19+ CD20+) 和类别转换记忆 B 细胞标记物 (IgD− IgM− IgG+ CD27+)。不幸的是，这些抗体分离方法都不是旨在捕获 B 细胞免疫球蛋白亚类信息，这些信息通常通过酶联免疫吸附测定 (ELISA) 对血清或血浆样品进行单独分析来评估。同样，基于流式的方法可同时读出抗体特异性和亚类，依赖于分析血清或血浆样品中存在的可溶性抗体，而不是直接对 B 细胞进行表型分析 [6]。尽管氨基酸序列存在相对较小的差异，但每个免疫球蛋白亚类在抗原结合和刺激 Fc 受体介导的吞噬作用、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性 (ADCC) 和补体激活方面都具有重要的功能差异 [7]。因此，随着人们对挖掘抗体库以从单个 B 细胞中识别功能性抗原特异性 mAb 的兴趣日益浓厚，我们设计并优化了一个面板以捕获单细胞水平的抗体亚类信息（图 1、表 2、图 S1 和 S2）。
2 BACKGROUNDAntibody discovery research has been instrumental in facilitating the isolation and characterization of therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) for cancer [1], autoimmune diseases [2], and infectious diseases, such as influenza and human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)[3, 4]. The approaches to human antibody isolation include B cell immortalization, yeast or phage display, single B cell culture, and antigen-specific single B cell sorting [5]. The latter two methods rely on single-cell sorting of memory B cells and typically employ a dump/exclusion gate to remove contaminating T cells (CD3− CD4− CD8−), monocytes/macrophages (CD14−) and dead cells (viability dye), and a staining panel to include B cell markers (CD19+ CD20+) and class-switched memory B cell markers (IgD− IgM− IgG+ CD27+). Unfortunately, none of these antibody isolation methods are designed to capture B cell immunoglobulin subclass information which is typically assessed by separate analysis of serum or plasma samples by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Likewise, flow-based methods to provide a simultaneous readout of both antibody specificity and subclass rely on assaying soluble antibodies present in serum or plasma samples rather than phenotyping B cells directly [6]. Despite relatively minor differences in amino acid sequence, each immunoglobulin subclass has important functional differences with respect to antigen binding and stimulation of Fc receptor-mediated phagocytosis, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC), and complement activation [7]. Thus, with growing interest in mining the antibody repertoire to identify functional antigen-specific mAbs from individual B cells, we designed and optimized a panel to capture antibody subclass information at the single-cell level (Figure 1, Table 2, Figures S1 and S2).
登录
查看更多内容
影响因子：
3.7
作者：
Wei, Chungwen;Jung, John;Sanz, Inaki
通讯作者：
Sanz, Inaki
DOI：
10.1038/nri2524
发表时间：
2009-04
期刊：
Nature reviews. Immunology
影响因子：
--
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
3.7
作者：
Liechti, Thomas;Roederer, Mario
通讯作者：
Roederer, Mario
DOI：
10.1007/978-981-13-0502-3_8
发表时间：
2018-01-01
期刊：
SINGLE CELL BIOMEDICINE
影响因子：
--
作者：
Voigt, Alexandria;Semenova, Touyana;Nguyen, Cuong Q.
通讯作者：
Nguyen, Cuong Q.
影响因子：
3.7
作者：
Carrell, Jeffrey;Groves, Christopher J.
通讯作者：
Groves, Christopher J.