Molecular dissection of TatC defines critical regions essential for protein transport and a TatB-TatC contact site.
Molecular dissection of TatC defines critical regions essential for protein transport and a TatB-TatC contact site.
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DOI：
10.1111/j.1365-2958.2012.08151.x
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发表时间：
2012-09
影响因子：
3.6
通讯作者：
Palmer T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kneuper H;Maldonado B;Jäger F;Krehenbrink M;Buchanan G;Keller R;Müller M;Berks BC;Palmer T
双胞胎精氨酸转运系统(TAT)通过原核细胞质膜和植物类囊体膜运输折叠蛋白。TATC是TAT机器中最大和最保守的部件。它与TatB形成多亚基复合体，并与TAT底物的信号肽结合。在这里，我们采取了一种随机突变的方法来鉴定大肠杆菌TatC中使蛋白质运输失活的替换。我们确定了32个单独的氨基酸替换，这些替换取消或严重损害了TatC的活性。大多数失活的取代位于TatC的前两个周质环内。预测这些区域具有保守的二级结构，广泛的氨基酸插入和缺失突变的结果与这些保守元件是TatC功能所必需的是一致的。在TatC的第五个跨膜螺旋上发现了三个失活的替代。失活的M205R变异体可被影响TatB跨膜螺旋氨基酸的突变所抑制。TatC M205C和TatB L9C突变体之间形成了位置特异性的二硫键，证实了TatC螺旋5和TatB跨膜螺旋之间的物理相互作用。这是这两个蛋白质之间第一个定位到单一氨基酸水平的分子接触位点。
The twin arginine transport (Tat) system transports folded proteins across the prokaryotic cytoplasmic membrane and the plant thylakoid membrane. TatC is the largest and most conserved component of the Tat machinery. It forms a multisubunit complex with TatB and binds the signal peptides of Tat substrates. Here we have taken a random mutagenesis approach to identify substitutions in Escherichia coli TatC that inactivate protein transport. We identify 32 individual amino acid substitutions that abolish or severely compromise TatC activity. The majority of the inactivating substitutions fall within the first two periplasmic loops of TatC. These regions are predicted to have conserved secondary structure and results of extensive amino acid insertion and deletion mutagenesis are consistent with these conserved elements being essential for TatC function. Three inactivating substitutions were identified in the fifth transmembrane helix of TatC. The inactive M205R variant could be suppressed by mutations affecting amino acids in the transmembrane helix of TatB. A physical interaction between TatC helix 5 and the TatB transmembrane helix was confirmed by the formation of a site-specific disulphide bond between TatC M205C and TatB L9C variants. This is the first molecular contact site mapped to single amino acid level between these two proteins.
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影响因子：
14.9
作者：
Cole C;Barber JD;Barton GJ
通讯作者：
Barton GJ
影响因子：
3.6
作者：
Jongbloed, JDH;Grieger, U;van Dijl, JM
通讯作者：
van Dijl, JM
DOI：
10.1073/pnas.76.9.4530
发表时间：
1979-01-01
影响因子：
11.1
作者：
CASADABAN, MJ;COHEN, SN
通讯作者：
COHEN, SN
影响因子：
5.6
作者：
de Leeuw, E;Granjon, T;Berks, BC
通讯作者：
Berks, BC
依赖于Tha4依赖性转运之前的类囊体三个依赖性前体蛋白与CPTATC-HCF106复合物结合。
影响因子：
7.8
作者：
Cline, K;Mori, H
通讯作者：
Mori, H