CRISPR deactivation in mammalian cells using photocleavable guide RNAs.
CRISPR deactivation in mammalian cells using photocleavable guide RNAs.
复制标题
使用可光裂解的指导RNA在哺乳动物细胞中的CRISPR失活。
DOI：
10.1016/j.xpro.2021.100909
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发表时间：
2021-12-17
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Ha T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zou RS;Liu Y;Ha T
按需灭活CRISPR-Cas系统的能力将提高基因组编辑的安全性和适用性。在这里，我们详细介绍了一种使用可光裂解的指导RNA（pcRNA）来灭活细胞内CRISPR-Cas9的方案。我们通过使用桑格测序检查插入-缺失（indel）突变来验证失活是快速和完全的。该方案将有助于研究人员使用pcRNA来提高基因组编辑特异性，表征基因组编辑的时间尺度，并研究细胞DNA损伤反应。有关本方案使用和执行的完整详细信息，请参阅。使用可光裂解的向导RNA使细胞内的CRISPR-Cas9失活的方案通过检查插入-缺失突变使失活既快速又完整可用于表征基因组编辑动态和DNA修复过程按需使CRISPR-Cas系统失活的能力将提高基因组编辑的安全性和适用性。在这里，我们详细介绍了一种使用可光裂解的指导RNA（pcRNA）来灭活细胞内CRISPR-Cas9的方案。我们通过使用桑格测序检查插入-缺失（indel）突变来验证失活是快速和完全的。该方案将有助于研究人员使用pcRNA来提高基因组编辑特异性，表征基因组编辑的时间尺度，并研究细胞DNA损伤反应。
The ability to deactivate CRISPR-Cas systems on demand would improve the safety and applicability of genome editing. Here, we detail a protocol using photocleavable guide RNAs (pcRNAs) to deactivate CRISPR-Cas9 inside cells. We verify that deactivation is both rapid and complete by checking for insertion-deletion (indel) mutations using Sanger sequencing. This protocol will be useful for researchers interested in using pcRNAs to improve genome editing specificity, characterize the timescales of genome editing, and study cellular DNA damage responses. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to. Protocol using photocleavable guide RNAs to deactivate CRISPR-Cas9 inside cells Deactivation is both rapid and complete by checking for insertion-deletion mutations Useful for characterizing genome editing dynamics and DNA repair processes The ability to deactivate CRISPR-Cas systems on demand would improve the safety and applicability of genome editing. Here, we detail a protocol using photocleavable guide RNAs (pcRNAs) to deactivate CRISPR-Cas9 inside cells. We verify that deactivation is both rapid and complete by checking for insertion-deletion (indel) mutations using Sanger sequencing. This protocol will be useful for researchers interested in using pcRNAs to improve genome editing specificity, characterize the timescales of genome editing, and study cellular DNA damage responses.
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影响因子：
16
作者：
Zou RS;Liu Y;Wu B;Ha T
通讯作者：
Ha T
影响因子：
14.9
作者：
Brinkman EK;Chen T;Amendola M;van Steensel B
通讯作者：
van Steensel B
DOI：
10.1126/science.aay8204
发表时间：
2020-06-12
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Liu Y;Zou RS;He S;Nihongaki Y;Li X;Razavi S;Wu B;Ha T
通讯作者：
Ha T
影响因子：
64.8
作者：
Hu JH;Miller SM;Geurts MH;Tang W;Chen L;Sun N;Zeina CM;Gao X;Rees HA;Lin Z;Liu DR
通讯作者：
Liu DR
CRISPR-CAS9编辑验证策略的调查。
影响因子：
4.6
作者：
Sentmanat MF;Peters ST;Florian CP;Connelly JP;Pruett-Miller SM
通讯作者：
Pruett-Miller SM