Genome engineering of mammalian haploid embryonic stem cells using the Cas9/RNA system.
Genome engineering of mammalian haploid embryonic stem cells using the Cas9/RNA system.
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作者：
Horii T;Morita S;Kimura M;Kobayashi R;Tamura D;Takahashi RU;Kimura H;Suetake I;Ohata H;Okamoto K;Tajima S;Ochiya T;Abe Y;Hatada I
单倍体胚胎干细胞(ESCs)对于研究哺乳动物的基因很有用，因为只有一个等位基因的破坏会导致功能丧失的表型。在这里，我们报告了使用单倍体ESCs和CRISPR RNA引导的Cas9核酸酶基因打靶系统来操纵哺乳动物的基因。将表达Cas9核酸酶的载体与针对Tet1、TET2和Tet3的单引导RNA(SgRNAs)共转染单倍体ESCs，可导致这三个基因的完全破坏，并导致高效(50%)的功能丧失表型。将针对同一染色体上两个位点的表达Cas9和sgRNAs的载体共转染细胞，可导致大量染色体缺失和大量倒位。因此，CRISPR系统与单倍体ESCs的结合使用为操纵哺乳动物基因组提供了一个强大的平台。
Haploid embryonic stem cells (ESCs) are useful for studying mammalian genes because disruption of only one allele can cause loss-of-function phenotypes. Here, we report the use of haploid ESCs and the CRISPR RNA-guided Cas9 nuclease gene-targeting system to manipulate mammalian genes. Co-transfection of haploid ESCs with vectors expressing Cas9 nuclease and single-guide RNAs (sgRNAs) targeting Tet1, Tet2, and Tet3 resulted in the complete disruption of all three genes and caused a loss-of-function phenotype with high efficiency (50%). Co-transfection of cells with vectors expressing Cas9 and sgRNAs targeting two loci on the same chromosome resulted in the creation of a large chromosomal deletion and a large inversion. Thus, the use of the CRISPR system in combination with haploid ESCs provides a powerful platform to manipulate the mammalian genome.
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影响因子：
64.5
作者：
Yang H;Wang H;Shivalila CS;Cheng AW;Shi L;Jaenisch R
通讯作者：
Jaenisch R
影响因子：
5.6
作者：
Horii T;Tamura D;Morita S;Kimura M;Hatada I
通讯作者：
Hatada I
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
通过反式编码的小 RNA 和宿主因子 RNase III 进行 CRISPR RNA 成熟。
影响因子：
64.8
作者：
Deltcheva, Elitza;Chylinski, Krzysztof;Sharma, Cynthia M.;Gonzales, Karine;Chao, Yanjie;Pirzada, Zaid A.;Eckert, Maria R.;Vogel, Joerg;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
DOI：
10.1126/science.1232033
发表时间：
2013-02-15
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
通讯作者：
Church GM