Intravital fluorescence microscopy of endothelial cells on vascular grafts.
Intravital fluorescence microscopy of endothelial cells on vascular grafts.
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血管移植物上内皮细胞的活体荧光显微镜检查。
DOI：
10.1016/0022-4804(89)90039-5
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发表时间：
1989
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Williams,SK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mechem,C;Jarrell,BE;Koolpe,E;Williams,SK
在内皮细胞播种技术之后，评估血管移植物上初始内皮细胞覆盖范围的能力对于证实内皮细胞衬里的耐久性是可取的。为此，我们评估了使用活体荧光显微镜来评估人内皮细胞与血管移植物的相互作用。对米霉素、赫斯特33342、双醋酸磺荧光素、尼罗红和罗丹明123这五种荧光染色剂进行荧光标记人内皮细胞的能力评估。每种染料的染色能力也被评估在确定种子细胞数量和细胞扩散方面的准确性。在评估的染色剂中，罗丹明123产生了最理想的特性。在30分钟的孵育后，我们观察到极好的细胞显像。与其他四种染色剂不同，罗丹明123在510 nm激发波长下表现出明亮的橙色荧光，而下面的涤纶或膨胀聚四氟乙烯表现出最小的自身荧光。罗丹明123也没有表现出抑制细胞附着在塑料或随后的细胞生长的培养作用。活体荧光显微镜可以很容易地在手术室中使用，在植入前观察部分或全部内皮细胞种子移植物，并允许对播种过程进行定量和定性评估。由于活体荧光成像不需要组织固定，因此可以直接植入与播种效率评估相同的表面。
The ability to evaluate the extent of initial endothelial cell coverage on a vascular graft subsequent to an endothelial cell seeding technique would be desirable to substantiate the durability of the endothelial cell lining. To this end, we have evaluated the use of intravital fluorescence microscopy to assess human endothelial cell interaction with vascular grafts. Five fluorescent stains, mithramycin, Hoechst 33342, sulfofluorescein diacetate, Nile red, and rhodamine 123 were evaluated for their ability to fluorescently label human endothelial cells. The staining capability of each dye was also evaluated with respect to accuracy in determining seeded cell number and cell spreading. Of the stains evaluated, rhodamine 123 produced the most desirable characteristics. We observed excellent cell visualization after a 30-min incubation. Unlike the other four stains, rhodamine 123 exhibited a bright orange fluorescence emission at a 510-nm excitation wavelength while the underlying dacron or expanded polytetrafluoroethylene demonstrated minimal autofluorescence. Rhodamine 123 also exhibited no inhibitory effect on cell attachment to plastic or subsequent cell growth in culture. Intravital fluorescence microscopy could be easily utilized in the operating room to visualize part or all of an endothelial cell-seeded graft prior to implantation and would permit a quantitative as well as qualitative evaluation of the seeding process. Since intravital fluorescence imaging does not require tissue fixation, the same surface as that evaluated for seeding efficiency can be directly implanted.
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--
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