Improvement of bacterial transformation efficiency using plasmid artificial modification.
Improvement of bacterial transformation efficiency using plasmid artificial modification.
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DOI：
10.1093/nar/gkn884
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发表时间：
2009-01
影响因子：
14.9
通讯作者：
Suzuki T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yasui K;Kano Y;Tanaka K;Watanabe K;Shimizu-Kadota M;Yoshikawa H;Suzuki T
我们已经开发了一种方法来提高基因组测序细菌的转化效率，使用“质粒人工修饰”（PAM），使用宿主自己的限制性系统。在该方法中，在进行电穿孔之前，将穿梭载体在大肠杆菌细胞中预甲基化，所述大肠杆菌细胞携带编码靶微生物的DNA修饰酶的所有推定基因。在双歧杆菌ATCC 15703和pKKT 427（3.9kb E. coli-Bifidobacterium穿梭载体），引入两个II型DNA甲基转移酶基因导致转化效率提高五个数量级。这一概念也适用于第一类限制系统。在乳酸乳球菌IO-1的情况下，通过使用PAM与推定的I型甲基转移酶系统hsdMS 1，转化效率比没有PAM的转化效率提高了7倍。
We have developed a method to improve the transformation efficiency in genome-sequenced bacteria, using ‘Plasmid Artificial Modification’ (PAM), using the host's own restriction system. In this method, a shuttle vector was pre-methylated in Escherichia coli cells, which carry all the putative genes encoding the DNA modification enzymes of the target microorganism, before electroporation was performed. In the case of Bifidobacterium adolescentis ATCC15703 and pKKT427 (3.9 kb E. coli-Bifidobacterium shuttle vector), introducing two Type II DNA methyltransferase genes lead to an enhancement in the transformation efficiency by five orders of magnitude. This concept was also applicable to a Type I restriction system. In the case of Lactococcus lactis IO-1, by using PAM with a putative Type I methyltransferase system, hsdMS1, the transformation efficiency was improved by a factor of seven over that without PAM.
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