Chromatin assembly at kinetochores is uncoupled from DNA replication.
Chromatin assembly at kinetochores is uncoupled from DNA replication.
复制标题
着丝粒处的染色质组装与 DNA 复制脱钩。
DOI：
10.1083/jcb.151.5.1113
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发表时间：
2000-11-27
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sullivan KF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Shelby RD;Monier K;Sullivan KF
后生动物着丝粒的规范并不严格取决于着丝粒DNA序列，还需要表观遗传因素。在 DNA 上建立着丝粒“状态”的机制基础仍不清楚。在这项工作中，我们直接检查了人类染色体前动粒域的复制时间。动粒通过表位标记的 CENP-A 的表达进行标记，它稳定地标记人类细胞中的前动粒结构域。通过免疫沉淀来自用[3H]胸苷脉冲的同步化细胞的CENP-A单核小体，我们证明CENP-A相关DNA在S期中后期进行复制。 DNA复制的细胞学分析进一步证明着丝粒与许多其他基因组区域并行异步复制。相反，定量蛋白质印迹分析表明 CENP-A 蛋白质合成发生较晚，在 G2 中。定量荧光显微镜和在 DNA 复制抑制剂 aphidicolin 存在下的瞬时转染表明，CENP-A 可以在没有 DNA 复制的情况下组装成着丝粒。因此，与大多数基因组染色质不同，组蛋白合成和组装与动粒处的 DNA 复制脱钩。 DNA 复制与 CENP-A 合成的解偶联表明，受调节的染色质组装或重塑可能在表观遗传着丝粒传播中发挥作用。
The specification of metazoan centromeres does not depend strictly on centromeric DNA sequences, but also requires epigenetic factors. The mechanistic basis for establishing a centromeric “state” on the DNA remains unclear. In this work, we have directly examined replication timing of the prekinetochore domain of human chromosomes. Kinetochores were labeled by expression of epitope-tagged CENP-A, which stably marks prekinetochore domains in human cells. By immunoprecipitating CENP-A mononucleosomes from synchronized cells pulsed with [3H]thymidine we demonstrate that CENP-A–associated DNA is replicated in mid-to-late S phase. Cytological analysis of DNA replication further demonstrated that centromeres replicate asynchronously in parallel with numerous other genomic regions. In contrast, quantitative Western blot analysis demonstrates that CENP-A protein synthesis occurs later, in G2. Quantitative fluorescence microscopy and transient transfection in the presence of aphidicolin, an inhibitor of DNA replication, show that CENP-A can assemble into centromeres in the absence of DNA replication. Thus, unlike most genomic chromatin, histone synthesis and assembly are uncoupled from DNA replication at the kinetochore. Uncoupling DNA replication from CENP-A synthesis suggests that regulated chromatin assembly or remodeling could play a role in epigenetic centromere propagation.
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影响因子：
11.4
作者：
Csink, AK;Henikoff, S
通讯作者：
Henikoff, S
DOI：
10.1073/pnas.88.9.3734
发表时间：
1991-05-01
影响因子：
11.1
作者：
PALMER, DK;ODAY, K;MARGOLIS, RL
通讯作者：
MARGOLIS, RL
影响因子：
56.9
作者：
Takahashi, K;Chen, ES;Yanagida, M
通讯作者：
Yanagida, M
影响因子：
9.2
作者：
Vafa, O;Sullivan, KF
通讯作者：
Sullivan, KF
DOI：
10.1083/jcb.136.3.501
发表时间：
1997-02-10
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Shelby RD;Vafa O;Sullivan KF
通讯作者：
Sullivan KF