Direct supercritical angle localization microscopy for nanometer 3D superresolution.
Direct supercritical angle localization microscopy for nanometer 3D superresolution.
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DOI：
10.1038/s41467-021-21333-x
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发表时间：
2021-02-19
影响因子：
16.6
通讯作者：
Ries J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Dasgupta A;Deschamps J;Matti U;Hübner U;Becker J;Strauss S;Jungmann R;Heintzmann R;Ries J
3D单分子定位显微镜（SMLM）是一种新兴的结构细胞生物学超分辨率方法，因为它可以探测细胞结构中蛋白质的精确位置。在超临界角定位显微镜（SALM）中，从超临界角荧光的强度中提取单个荧光团的z位置，这在很大程度上取决于它们到盖玻片的距离。在这里，我们实现了SALM的全部潜力，并通过直接分离超临界和亚临界发射，使用超高NA目标，并应用拟合例程来提取单个发射器的精确强度，将其z分辨率提高了四倍以上。我们证明了纳米各向同性定位精度的DNA折纸结构，网格蛋白包被的囊泡和微管在细胞中，说明了潜在的SALM细胞生物学。超临界角定位显微镜（SALM）允许从超临界角荧光的强度中提取单个荧光团的z位置。在这里，作者改进了SALM的z分辨率，并报告了DNA折纸结构的纳米各向同性定位精度。
3D single molecule localization microscopy (SMLM) is an emerging superresolution method for structural cell biology, as it allows probing precise positions of proteins in cellular structures. In supercritical angle localization microscopy (SALM), z-positions of single fluorophores are extracted from the intensity of supercritical angle fluorescence, which strongly depends on their distance to the coverslip. Here, we realize the full potential of SALM and improve its z-resolution by more than four-fold compared to the state-of-the-art by directly splitting supercritical and undercritical emission, using an ultra-high NA objective, and applying fitting routines to extract precise intensities of single emitters. We demonstrate nanometer isotropic localization precision on DNA origami structures, and on clathrin coated vesicles and microtubules in cells, illustrating the potential of SALM for cell biology. Supercritical angle localisation microscopy (SALM) allows the z-positions of single fluorophores to be extracted from the intensity of supercritical angle fluorescence. Here the authors improve the z-resolution of SALM, and report nanometre isotropic localisation precision on DNA origami structures.
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