A sandwich ELISA for measuring benzo[a]pyrene-albumin adducts in human plasma.
A sandwich ELISA for measuring benzo[a]pyrene-albumin adducts in human plasma.
复制标题
DOI：
10.1016/j.ab.2012.12.021
复制
发表时间：
2013-04-15
影响因子：
2.9
通讯作者：
Rappaport SM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chung MK;Regazzoni L;McClean M;Herrick R;Rappaport SM
多环芳烃（PAHs）暴露通常通过致癌代谢物苯并[a]芘二环氧二醇（BPDE）的DNA或人血清白蛋白（HSA）加合物来量化。我们之前报道了一种夹心酶联免疫吸附测定（ELISA），使用8E11作为捕获抗体，抗 - HSA作为检测抗体，可检测从血浆中分离出的HSA中完整的BPDE加合物。在确认BPDE在His146和Lys195位点与人血清白蛋白结合后，我们对ELISA进行了改进，以直接测量人血浆中完整的BPDE - HSA。为了调整由于非特异性结合在孔表面的HSA以及抗体的交叉反应性所造成的干扰，ELISA采用成对的孔，其中一组添加BPDE四醇以使8E11失活，另一组不添加。通过进行四次重复测定，采用一系列针对样本的调整和筛选步骤来减少因检测普通人群中低浓度BPDE - HSA而产生的测量误差。对吸烟和不吸烟受试者血浆中BPDE - HSA的ELISA测量（范围：0.335 - 0.941纳克BPDE - HSA/毫克HSA；4.59 - 47.2飞摩尔BPDE - HSA/毫克HSA）以及接触和未接触沥青排放的公路工人血浆中BPDE - HSA的测量（范围：0.346 - 13.8纳克BPDE - HSA/毫克HSA；5.68 - 228飞摩尔BPDE - HSA/毫克HSA）检测到BPDE - HSA水平在预先预期的方向上存在差异。
Exposures to polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) have often been quantified via DNA or human-serum albumin (HSA) adducts of the carcinogenic metabolite, benzo[a]pyrene diolepoxide (BPDE). We previously reported a sandwich ELISA, using 8E11 as capture antibody and anti-HSA as detection antibody, that detected intact BPDE adducts in HSA isolated from plasma. After confirming that BPDE binds to HSA at His146 and Lys195, we modified the ELISA to measure intact BPDE-HSA directly in human plasma. To adjust for interferences due to nonspecifically bound HSA on well surfaces and to cross reactivity of the antibodies, the ELISA employs paired wells with and without addition of BPDE tetrols to deactivate 8E11. By performing assays in quadruplicate, a series of sample-specific adjustments and screening steps are used to reduce measurement errors that are a consequence of detecting low BPDE-HSA concentrations in the general population. ELISA measurements of BPDE-HSA in plasma from smoking and nonsmoking subjects (range: 0.335 – 0.941 ng BPDE-HSA/mg HSA; 4.59 – 47.2 fmol BPDE-HSA/mg HSA) and from highway workers with and without exposures to asphalt emissions (range: 0.346 – 13.8 ng BPDE-HSA/mg HSA; 5.68 – 228 fmol BPDE-HSA/mg HSA) detected differences in BPDE-HSA levels in the a priori- expected directions.
登录
查看更多内容
影响因子：
2.9
作者：
Chung MK;Riby J;Li H;Iavarone AT;Williams ER;Zheng Y;Rappaport SM
通讯作者：
Rappaport SM
DOI：
10.1093/jnci/86.18.1398
发表时间：
1994-09-21
期刊：
JOURNAL OF THE NATIONAL CANCER INSTITUTE
影响因子：
--
作者：
CRAWFORD, FG;MAYER, J;PERERA, FP
通讯作者：
PERERA, FP
影响因子：
5
作者：
KHALILI, NR;SCHEFF, PA;HOLSEN, TM
通讯作者：
HOLSEN, TM
影响因子：
6.3
作者：
LEE, BM;BAOYUN, Y;SANTELLA, RM
通讯作者：
SANTELLA, RM
影响因子：
10.4
作者：
Choi, Hyunok;Jedrychowski, Wieslaw;Spengler, John;Camann, David E;Whyatt, Robin M;Rauh, Virginia;Tsai, Wei-Yann;Perera, Frederica P
通讯作者：
Perera, Frederica P