Probing enzymatic activity inside living cells using a nanowire-cell "sandwich" assay.
Probing enzymatic activity inside living cells using a nanowire-cell "sandwich" assay.
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DOI：
10.1021/nl3037068
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发表时间：
2013-01-09
期刊：
影响因子：
10.8
通讯作者：
Yang EG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Na YR;Kim SY;Gaublomme JT;Shalek AK;Jorgolli M;Park H;Yang EG
在细胞内信号转导通路的背景下，开发酶功能的详细了解需要微创方法原位探测酶活性。在这里，我们描述了一种新的方法，用于监测酶的活性在活细胞之间的两个垂直的硅纳米线（NW）阵列的活细胞。具体地，我们使用第一NW阵列来包裹细胞，然后通过利用NW穿透细胞膜而不影响细胞活力或功能的能力经由第二NW阵列在细胞内呈递酶底物。这种策略，再加上荧光显微镜和质谱，使细胞内检查蛋白酶，磷酸酶和蛋白激酶的活动，展示了该测定的潜力，揭示了各种酶的生理作用。
Developing a detailed understanding of enzyme function in the context of an intracellular signal transduction pathway requires minimally invasive methods for probing enzyme activity in situ. Here, we describe a new method for monitoring enzyme activity in living cells by sandwiching live cells between two vertical silicon nanowire (NW) arrays. Specifically, we use the first NW array to immobilize the cells, and then present enzymatic substrates intracellularly via the second NW array by utilizing the NWs’ ability to penetrate cellular membranes without affecting cells’ viability or function. This strategy, when coupled with fluorescence microscopy and mass spectrometry, enables intracellular examination of protease, phosphatase and protein kinase activities, demonstrating the assay’s potential in uncovering the physiological roles of various enzymes.
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影响因子：
64.5
作者：
Chevrier N;Mertins P;Artyomov MN;Shalek AK;Iannacone M;Ciaccio MF;Gat-Viks I;Tonti E;DeGrace MM;Clauser KR;Garber M;Eisenhaure TM;Yosef N;Robinson J;Sutton A;Andersen MS;Root DE;von Andrian U;Jones RB;Park H;Carr SA;Regev A;Amit I;Hacohen N
通讯作者：
Hacohen N
影响因子：
14.8
作者：
Kardash, Elena;Bandemer, Jan;Raz, Erez
通讯作者：
Raz, Erez
影响因子：
3.5
作者：
Liu, Yi-Chi C.;Rieben, Nathalie;Martinez, Karen L.
通讯作者：
Martinez, Karen L.
影响因子：
7.8
作者：
Edgington, Laura E.;Verdoes, Martijn;Bogyo, Matthew
通讯作者：
Bogyo, Matthew
影响因子：
10.8
作者：
Hanson, Lindsey;Lin, Ziliang Carter;Cui, Bianxiao
通讯作者：
Cui, Bianxiao