Multiple-step ligand injection affinity capillary electrophoresis for determining binding constants of ligands to receptors.

Multiple-step ligand injection affinity capillary electrophoresis for determining binding constants of ligands to receptors.
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多步配体注射亲和毛细管电泳用于确定配体与受体的结合常数。

DOI:
10.1016/s0021-9673(00)00853-0
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发表时间:
2000
期刊:
Journal of chromatography. A
影响因子:
--
通讯作者:
Gomez,FA
Gomez,FA
中科院分区:
--
文献类型:
--
作者:
Zhang,Y;Gomez,FA

文献摘要

参考文献

被引文献

相似文献

本研究利用两种模型体系:东方链霉菌万古霉素和碳酸酐酶B (CAB, EC 4.2.1.1),展示了多级配体注射亲和毛细管电泳(ACE)的应用。在该技术中,通过压力注入受体和非相互作用标准的样品塞,并在含有给定浓度配体的缓冲液中电泳。对所有浓度的配体重复该序列,生成包含一系列单独样品塞的单一电泳图,这些样品塞叠加在含有浓度增加的配体的缓冲环境上。分析相对迁移时间比RMTR的变化,相对于非相互作用标准,作为配体浓度的函数,得到结合常数的值。竞争性分析使用该技术也证明了使用中性配体的CAB。这些值与使用其他结合和ACE技术估计的值一致。数据显示了该方法的定量潜力。
This work demonstrates the use of multiple-step ligand injection affinity capillary electrophoresis (ACE) using two model systems: vancomycin from Streptomyces orientalis and carbonic anhydrase B (CAB, EC 4.2.1.1). In this technique a sample plug of receptor and non-interacting standards is injected by pressure and electrophoresed in a buffer containing a given concentration of ligand. The sequence is repeated for all concentrations of ligand generating a single electropherogram containing a series of individual sample plugs superimposed on environments of buffer containing increasing concentrations of ligand. Analysis of the change in the relative migration time ratio, RMTR, relative to the non-interacting standards, as a function of the concentration of the ligand, yields a value for the binding constant. A competitive assay using the technique is also demonstrated using neutral ligands for CAB. These values agree well with those estimated using other binding and ACE techniques. Data demonstrating the quantitative potential of this method are presented.
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影响因子: --
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