Identification of potent inhibitors of the Trypanosoma brucei methionyl-tRNA synthetase via high-throughput orthogonal screening.
Identification of potent inhibitors of the Trypanosoma brucei methionyl-tRNA synthetase via high-throughput orthogonal screening.
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DOI：
10.1177/1087057114548832
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发表时间：
2015-01
影响因子：
--
通讯作者：
Hodder P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pedró-Rosa L;Buckner FS;Ranade RM;Eberhart C;Madoux F;Gillespie JR;Koh CY;Brown S;Lohse J;Verlinde CL;Fan E;Bannister T;Scampavia L;Hol WG;Spicer T;Hodder P
目前迫切需要改进治疗被忽视的热带病非洲人类锥虫病的病原体——布氏锥虫的疗法。我们的研究目标是布鲁氏虾甲硫基trna合成酶（MetRS），这是一种氨基酰基trna合成酶（aaRS），由于其在蛋白质合成、细胞存活中的作用以及与哺乳动物同源物在结构上的显著差异，它被认为是一个重要的药物靶点。先前使用RNA干扰MetRS的工作证实了布鲁氏杆菌的生长抑制，进一步证实了它是一个有吸引力的靶点。我们报告了两种正交高通量筛选方法的开发和实施，以鉴定布鲁氏T. mems的抑制剂。首先，在1536孔板上进行化学发光试验，用于监测氨基酰化反应过程中ATP的消耗。然后使用反筛确认命中，其中使用荧光偏振技术评估AMP的产生。此外，一个小型化的细胞活力测定被用来分类细胞毒性化合物。最后，采用低通量实验对人类和寄生虫的全虫生长进行抑制，分析化合物的选择性和有效性。这项HTS运动的结果导致了19种有效和选择性的布鲁氏t细胞mes抑制剂的发现。
Improved therapies for the treatment of Trypanosoma brucei (T. brucei), the etiological agent of the neglected tropical disease human African trypanosomiasis, are urgently needed. We targeted T. brucei methionyl-tRNA synthetase (MetRS), an aminoacyl-tRNA synthase (aaRS), which is considered an important drug target due to its role in protein synthesis, cell survival and its significant differences in structure from its mammalian ortholog. Previous work using RNA interference of MetRS demonstrated growth inhibition of T. brucei, further validating it as an attractive target. We report the development and implementation of two orthogonal high throughput screening assays to identify inhibitors of T. brucei MetRS. First, a chemiluminescence assay was implemented in 1536-well plate format and used to monitor ATP depletion during the aminoacylation reaction. Hit confirmation then used a counterscreen in which AMP production was assessed using fluorescence polarization technology. In addition, a miniaturized cell viability assay was used to triage cytotoxic compounds. Finally, lower throughput assays involving whole parasite growth inhibition of both human and parasite MetRS were used to analyze compound selectivity and efficacy. The outcome of this HTS campaign has led to the discovery of nineteen potent and selective T. brucei MetRS inhibitors.
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DOI：
10.1016/j.str.2012.07.011
发表时间：
2012-10-10
期刊：
Structure (London, England : 1993)
影响因子：
--
作者：
Koh CY;Kim JE;Shibata S;Ranade RM;Yu M;Liu J;Gillespie JR;Buckner FS;Verlinde CL;Fan E;Hol WG
通讯作者：
Hol WG
影响因子：
--
作者：
Madoux F;Simanski S;Chase P;Mishra JK;Roush WR;Ayad NG;Hodder P
通讯作者：
Hodder P
影响因子：
4.5
作者：
Raczniak, G;Ibba, M;Söll, D
通讯作者：
Söll, D
影响因子：
4.1
作者：
GODEAU, JM;CHARLIER, J
通讯作者：
CHARLIER, J
影响因子：
--
作者：
Wu, G;Yuan, Y;Hodge, CN
通讯作者：
Hodge, CN