Preparative Protein Production from Inclusion Bodies and Crystallization: A Seven-Week Biochemistry Sequence.
Preparative Protein Production from Inclusion Bodies and Crystallization: A Seven-Week Biochemistry Sequence.
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由包含体和结晶产生的制备蛋白质：一个为期七周的生物化学序列。
DOI：
10.1021/ed100594h
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发表时间：
2011-07-01
影响因子：
3
通讯作者：
McFarland, Benjamin J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Peterson, Megan J.;Snyder, W. Kalani;Westerman, Shelley;McFarland, Benjamin J.
关键词：
我们描述了如何生产和纯化蛋白质从大肠杆菌包涵体通过适应多功能，制备规模的技术，以本科实验室的时间表。这个为期七周的实验序列符合生物化学课程的年度研究活动周期。重组蛋白以包涵体的形式表达，收集包涵体，清洗，然后在尿素中溶解。在一周的时间里，逐步透析稀释尿素会产生再折叠蛋白。柱层析是用来纯化蛋白质成部分，然后用凝胶电泳和浓度测定分析。学生们通过设计坐落托盘中的结晶试验来完成这个项目。学生们对这次经历的评价是积极的，列出了5-12个学到的新技术，这些技术可以转移到学术界和工业界的研究生研究中。
We describe how to produce and purify proteins from E. coli inclusion bodies by adapting versatile, preparative-scale techniques to the undergraduate laboratory schedule. This seven-week sequence of experiments fits into an annual cycle of research activity in biochemistry courses. Recombinant proteins are expressed as inclusion bodies, which are collected, washed, then solubilized in urea. Stepwise dialysis to dilute urea over the course of a week produces refolded protein. Column chromatography is used to purify protein into fractions, which are then analyzed with gel electrophoresis and concentration assays. Students culminate the project by designing crystallization trials in sitting-drop trays. Student evaluation of the experience has been positive, listing 5–12 new techniques learned, which are transferrable to graduate research in academia and industry.
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