Transposon transgenesis in Xenopus.
Transposon transgenesis in Xenopus.
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DOI：
10.1016/j.ymeth.2010.03.001
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发表时间：
2010-05
期刊：
影响因子：
4.8
通讯作者：
Mead, Paul E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yergeau, Donald A.;Kelley, Clair M.;Zhu, Haiqing;Kuliyev, Emin;Mead, Paul E.
转座子介导的非洲爪蟾整合策略为生殖系转基因动物的产生提供了简单而稳健的方法。将受精的单细胞胚胎与携带转座子转基因的质粒DNA和编码同源转座酶的合成mRNA共注射导致转座子在早期卵裂阶段的嵌合整合，所述早期卵裂阶段经常通过成年动物的生殖系。受精胚胎的显微注射是许多使用非洲爪蟾作为发育模型的实验室使用的常规程序，因此，转座子转基因方法可以在没有额外设备或专门方法的情况下进行。注射非洲爪蟾胚胎的方法在文献中有很好的记载，所以在这里，我们提供了一个循序渐进的指导转座子转基因的其他方面，包括筛选嵌合体创始人的转基因的种系传输和一般的饲养管理有关的转基因青蛙种群的考虑。
Transposon-mediated integration strategies in Xenopus offer simple and robust methods for the generation of germline transgenic animals. Co-injection of fertilized one-cell embryos with plasmid DNA harboring a transposon transgene and synthetic mRNA encoding the cognate transposase enzyme results in mosaic integration of the transposon at early cleavage stages that are frequently passed through the germline in the adult animal. Micro-injection of fertilized embryos is a routine procedure used by many laboratories that use Xenopus as a developmental model and, as such, the transposon transgenesis method can be performed without additional equipment or specialized methodologies. The methods for injecting Xenopus embryos are well documented in the literature so here we provide a step-by-step guide to other aspects of transposon transgenesis, including screening mosaic founders for germline transmission of the transgene and general husbandry considerations related to management of populations of transgenic frogs.
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