Identification and validation of reference genes for gene expression analysis using quantitative PCR in Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae).
Identification and validation of reference genes for gene expression analysis using quantitative PCR in Spodoptera litura (Lepidoptera: Noctuidae).
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使用定量 PCR 鉴定和验证斜纹夜蛾（鳞翅目：夜蛾科）基因表达分析的参考基因
DOI：
10.1371/journal.pone.0068059
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Li J
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Lu Y;Yuan M;Gao X;Kang T;Zhan S;Wan H;Li J
逆转录定量聚合酶链反应（qRT-PCR）已迅速成为基因表达定量的最灵敏和最准确的方法。为了促进基因表达研究并获得更准确的qRT-PCR数据，需要相对于稳定管家基因进行归一化。这些管家基因需要在给定的实验条件下显示稳定的表达，以使qRT-PCR结果准确。遗憾的是，目前还没有关于斜纹夜蛾管家基因稳定性的研究。在这项研究中，8个候选参考基因，延伸因子1 α（EF 1），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），核糖体蛋白L10（RPL 10），核糖体蛋白S3（RPS 3），β肌动蛋白（ACTB），β FTZ-F1（FTZF 1），泛喹啉-细胞色素c还原酶（UCCR）和精氨酸激酶（AK），使用统计软件程序BestKeeper、geNorm和Normfinder以及比较ΔCt方法评估它们在不同实验条件下作为标准化基因的适用性。我们确定了三个生物因素（发育阶段，组织和人口），和四个非生物处理（温度，杀虫剂，食物和饥饿）的候选参考基因的表达水平。结果表明，作为参考基因的最佳候选基因组合为：发育阶段的GAPDH和UCCR，不同组织的RPL 10、AK和EF 1，中国不同种群的RPL 10和EF 1，温度胁迫下的GAPDH和EF 1，不同杀虫剂处理下的AK和ACTB，不同饲料下的RPL 10、GAPDH和UCCR，不同组织的RPL 10和EF 1，不同虫态的RPL 10、GAPDH和EF 1。饥饿幼虫的RPS 3和ACTB。我们认为这些结果为S.为进一步研究斜纹夜蛾的稳定参考基因奠定了基础。斜纹夜蛾和其他生物。
Reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (qRT-PCR) has rapidly become the most sensitive and accurate method for the quantification of gene expression. To facilitate gene expression studies and obtain more accurate qRT-PCR data, normalization relative to stable housekeeping genes is required. These housekeeping genes need to show stable expression under the given experimental conditions for the qRT-PCR results to be accurate. Unfortunately, there are no studies on the stability of housekeeping genes used in Spodoptera litura. In this study, eight candidate reference genes, elongation factor 1 alpha (EF1), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), ribosomal protein L10 (RPL10), ribosomal protein S3 (RPS3), beta actin (ACTB), beta FTZ-F1 (FTZF1), ubiquinol-cytochrome c reductase (UCCR), and arginine kinase (AK), were evaluated for their suitability as normalization genes under different experimental conditions using the statistical software programs, BestKeeper, geNorm and Normfinder, and the comparative ΔCt method. We determined the expression levels of the candidate reference genes for three biotic factors (developmental stage, tissue and population), and four abiotic treatments (temperature, insecticide, food and starvation). The results indicated that the best sets of candidates as reference genes were as follows: GAPDH and UCCR for developmental stages; RPL10, AK and EF1 for different tissues; RPL10 and EF1 for different populations in China; GAPDH and EF1 for temperature-stressed larvae; AK and ACTB for larvae treated with different insecticides; RPL10, GAPDH and UCCR for larvae fed different diets; RPS3 and ACTB for starved larvae. We believe that these results make an important contribution to gene analysis studies in S. litura and form the basis of further research on stable reference genes in S. litura and other organisms.
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