High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR-Cas nucleases in human cells.
High-frequency off-target mutagenesis induced by CRISPR-Cas nucleases in human cells.
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DOI：
10.1038/nbt.2623
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发表时间：
2013-09
影响因子：
46.9
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
CRISPR RNA引导的核酸内切酶(RGen)已迅速成为一种简便有效的基因组编辑平台。在这里，我们使用基于人类细胞的报告实验来表征基于Cas9的抗原的非靶标切割。我们发现，根据引导RNA(GRNA)-DNA界面上的位置不同，单错配和双错配可以被不同程度的容忍。我们通过检查部分不匹配的位点，很容易检测到6个抗原中有4个靶向于人类细胞内源性基因的非靶点改变。我们发现的靶外位点存在多达五个错配，许多突变的频率与预期的靶点上观察到的频率相当(或更高)。我们的工作表明，即使在人类细胞中存在不完全匹配的RNA-DNA接口，抗原也是高度活跃的，这一发现可能会混淆它们在研究和治疗应用中的用途。
CRISPR RNA-guided endonucleases (RGENs) have rapidly emerged as a facile and efficient platform for genome editing. Here, we use a human cell-based reporter assay to characterize off-target cleavage of Cas9-based RGENs. We find that single and double mismatches are tolerated to varying degrees depending on their position along the guide RNA (gRNA)-DNA interface. We readily detected off-target alterations induced by four out of six RGENs targeted to endogenous loci in human cells by examination of partially mismatched sites. The off-target sites we identified harbor up to five mismatches and many are mutagenized with frequencies comparable to (or higher than) those observed at the intended on-target site. Our work demonstrates that RGENs are highly active even with imperfectly matched RNA-DNA interfaces in human cells, a finding that might confound their use in research and therapeutic applications.
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影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
46.9
作者：
Cho, Seung Woo;Kim, Sojung;Kim, Jin-Soo
通讯作者：
Kim, Jin-Soo
影响因子：
46.9
作者：
通讯作者：
--
DOI：
10.1126/science.1232033
发表时间：
2013-02-15
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Mali P;Yang L;Esvelt KM;Aach J;Guell M;DiCarlo JE;Norville JE;Church GM
通讯作者：
Church GM