Manipulating and Visualizing the Germline with Transgenic Lines.
Manipulating and Visualizing the Germline with Transgenic Lines.
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用转基因系操纵和可视化种系。
DOI：
10.1007/978-1-0716-0970-5_21
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发表时间：
2021
影响因子：
--
通讯作者：
Yonghua Sun
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ding Ye;Yonghua Sun
用增强型绿色荧光蛋白（eGFP）特异性标记转基因斑马鱼的生殖细胞，可以连续观察从早期胚胎的原始生殖细胞（PGCs）到成熟性腺的配子的整个生命周期的生殖细胞发育过程。在这一章中，我们描述了一个程序，用于生成转基因鱼Tg（piwil 1：egfp-UTRNanos 3），PGC的活成像的样品制备，在性腺发育中的生殖细胞的高分辨率成像，并定量PGC的数量。本章所介绍的方法不仅适用于生殖细胞的研究，也为愿意进行转基因斑马鱼的研究以及在活胚胎和固定组织上进行观察的研究者提供了一般性的建议。
Transgenic zebrafish in which the germline is specifically labeled with enhanced green fluorescent protein (eGFP) can be used for continuous observation of germline development during the lifetime, from the primordial germ cells (PGCs) in the early embryo to the gametes in the mature gonad. In this chapter, we describe a procedure for the generation of transgenic fish Tg(piwil1:egfp-UTRnanos3), the sample preparation for live imaging of PGCs, for high-resolution imaging of germ cells in developing gonads, and quantifying PGC numbers. The methods described in this chapter are not only applicable to the study of germ cells, but also provide general advices for researchers who are willing to generate transgenic zebrafish and do observation on live embryos as well as on fixed tissues.
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