CRISPR Screens Identify Toxoplasma Genes That Determine Parasite Fitness in Interferon Gamma-Stimulated Human Cells.
CRISPR Screens Identify Toxoplasma Genes That Determine Parasite Fitness in Interferon Gamma-Stimulated Human Cells.
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DOI：
10.1128/mbio.00060-23
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发表时间：
2023-04-25
期刊：
影响因子：
6.4
通讯作者：
Saeij, Jeroen P. J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Krishnamurthy, Shruthi;Maru, Parag;Wang, Yifan;Bitew, Mebratu A.;Mukhopadhyay, Debanjan;Yamaryo-Botte, Yoshiki;Paredes-Santos, Tatiana C.;Sangare, Lamba O.;Swale, Christopher;Botte, Cyrille Y.;Saeij, Jeroen P. J.
弓形虫的毒力依赖于其逃避或存活于干扰素γ诱导的弓形虫杀伤机制的能力。虽然许多与逃避小鼠干扰素γ反应有关的弓形虫基因已经被确定，但人类干扰素γ反应中生存所需的基因在很大程度上是未知的。在这项研究中，我们使用全基因组功能丧失筛查来鉴定在干扰素γ刺激的原代人成纤维细胞中对寄生虫适合性重要的弓形虫基因。我们从屏幕上为前六个点击生成了基因敲除，并确认了它们对干扰素γ刺激的人成纤维细胞中寄生虫生长的重要性。在这六个基因中，有三个与GRA32同源，定位于致密颗粒，并与GRA32相互免疫共沉淀，提示它们可能形成了一个复合体。该复合体的单个成员的缺失导致干扰素γ刺激的细胞中的早期寄生虫外泄。因此，在干扰素γ刺激的人类细胞中，防止早期排泄是一个重要的弓形虫适合性决定因素。
Toxoplasma virulence depends on its ability to evade or survive the toxoplasmacidal mechanisms induced by interferon gamma (IFNγ). While many Toxoplasma genes involved in the evasion of the murine IFNγ response have been identified, genes required to survive the human IFNγ response are largely unknown. In this study, we used a genome-wide loss-of-function screen to identify Toxoplasma genes important for parasite fitness in IFNγ-stimulated primary human fibroblasts. We generated gene knockouts for the top six hits from the screen and confirmed their importance for parasite growth in IFNγ-stimulated human fibroblasts. Of these six genes, three have homology to GRA32, localize to dense granules, and coimmunoprecipitate with each other and GRA32, suggesting they might form a complex. Deletion of individual members of this complex leads to early parasite egress in IFNγ-stimulated cells. Thus, prevention of early egress is an important Toxoplasma fitness determinant in IFNγ-stimulated human cells.
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DOI：
10.2147/dddt.s60973
发表时间：
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Drug design, development and therapy
影响因子：
--
作者：
Alday PH;Doggett JS
通讯作者：
Doggett JS
DOI：
10.1083/jcb.200309097
发表时间：
2004-06-07
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Arrizabalaga G;Ruiz F;Moreno S;Boothroyd JC
通讯作者：
Boothroyd JC
DOI：
10.1084/jem.20201314
发表时间：
2021-11-01
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Frickel EM;Hunter CA
通讯作者：
Hunter CA
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LaFavers KA;Márquez-Nogueras KM;Coppens I;Moreno SNJ;Arrizabalaga G
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Arrizabalaga G
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Boothroyd JC