Membrane targeted horseradish peroxidase as a marker for correlative fluorescence and electron microscopy studies.
Membrane targeted horseradish peroxidase as a marker for correlative fluorescence and electron microscopy studies.
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DOI：
10.3389/neuro.04.006.2010
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发表时间：
2010
影响因子：
3.5
通讯作者：
Cline HT
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li J;Wang Y;Chiu SL;Cline HT
突触动力学和重组是突触可塑性的基本特征，无论是在突触回路发育过程中，还是在成熟的中枢神经系统中，都是学习、记忆和经验依赖性回路重排的基础。结合体内延时荧光成像和回顾性电子显微镜分析提供了一种强大的技术来破译神经元结构和突触连接的动力学规则。在这里，我们已经产生了一个膜靶向辣根过氧化物酶（mHRP），允许识别转染的细胞，而不模糊的细胞内超微结构或细胞器，特别是允许识别突触部位，使用电子显微镜。mHRP的表达不影响树突状细胞的生长和动力学。共表达的EGFP和mHRP被用来研究神经元的形态学在光镜和电镜水平。mHRP表达极大地促进了基于连续EM切片的3D重建。我们希望这种试剂将是有价值的研究机制，指导神经网络的建设。
Synaptic dynamics and reorganization are fundamental features of synaptic plasticity both during synaptic circuit development and in the mature CNS underlying learning, memory, and experience-dependent circuit rearrangements. Combining in vivo time-lapse fluorescence imaging and retrospective electron microscopic analysis provides a powerful technique to decipher the rules governing dynamics of neuronal structure and synaptic connections. Here we have generated a membrane-targeted horseradish peroxidase (mHRP) that allows identification of transfected cells without obscuring the intracellular ultrastructure or organelles and in particular allows identification of synaptic sites using electron microscopy. The expression of mHRP does not affect dendritic arbor growth or dynamics of transfected neurons. Co-expression of EGFP and mHRP was used to study neuronal morphology at both the light and electron microscopic levels. mHRP expression greatly facilitates 3D reconstruction based on serial EM sections. We expect this reagent will be valuable for studying the mechanisms that guide construction of neuronal networks.
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