An immortalized human blood-nerve barrier endothelial cell line for in vitro permeability studies.
An immortalized human blood-nerve barrier endothelial cell line for in vitro permeability studies.
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用于体外渗透性研究的永生化人血神经屏障内皮细胞系。
DOI：
10.1007/s10571-012-9882-7
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发表时间：
2013-03
影响因子：
4
通讯作者：
Ubogu, Eroboghene E.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Yosef, Nejla;Ubogu, Eroboghene E.
关键词：
溶质和大分子转运研究可以阐明健康和患病周围神经的营养需求和药物作用。神经内膜内皮细胞是形成限制性血神经屏障（BNB）的特化微血管细胞。原代人神经内膜内皮细胞（pHEendEC）难以分离，限制了其用于生物医学研究的广泛可用性。我们通过稳定转染低传代pHEEndEC开发了猴病毒-40大T抗原（SV 40-LTA）永生化的人BNB细胞系，并观察到在培养物中连续生长>45个群体倍增时间。如用pHEEndECs观察到的，永生化的BNB内皮细胞是荆豆凝集素-1（UEA-1）阳性的，并且内吞低密度脂蛋白，但失去血管性血友病因子（vWF）表达。葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）、P-糖蛋白（P-gp）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、大分子中性氨基酸转运蛋白-1（LAT-1）、肌酸转运蛋白（CRT）和单羧酸转运蛋白-1（MCT-1）mRNA表达在所有传代时均保留，在第16-20代后碱性磷酸酶（AP）表达丧失。与SV 40-LTA永生化人血脑屏障（BBB）内皮细胞系相比，BNB细胞系在第20代时γ-GT蛋白表达增加，有机阴离子转运多肽-C（OATP-C）、有机阴离子转运蛋白3（OAT-3）、MCT-1和LAT-1表达相当，AP、CRT和P-gp表达减少。进一步的研究表明，BNB细胞系的跨内皮电阻较低（TEER：~181 Ω. cm 2 vs. 191 Ω. cm 2），对荧光素钠的渗透性相当（4.84% vs. 4.39%），对荧光素化高分子量（70 kDa）葡聚糖的渗透性较低（0.39% vs. 0.52%）。该细胞系保留了适用于体外外周神经通透性研究的基本分子和生物物理特性。
Solute and macromolecular transport studies may elucidate nutritional requirements and drug effects in healthy and diseased peripheral nerves. Endoneurial endothelial cells are specialized microvascular cells that form the restrictive blood-nerve barrier (BNB). Primary human endoneurial endothelial cells (pHEndECs) are difficult to isolate, limiting their widespread availability for biomedical research. We developed a simian virus-40 large T-antigen (SV40-LTA) immortalized human BNB cell line via stable transfection of low passage pHEndECs and observed continuous growth in culture for >45 population doublings. As observed with pHEndECs, the immortalized BNB endothelial cells were Ulex Europaeus agglutinin-1 (UEA-1)-positive and endocytosed low density lipoprotein, but lost von Willebrand factor (vWF) expression. Glucose transporter-1 (GLUT-1), P-glycoprotein (P-gp), γ-glutamyl transpeptidase (γ-GT), large neutral amino acid transporter-1 (LAT-1), creatine transporter (CRT) and monocarboxylate transporter-1 (MCT-1) mRNA expression were retained at all passages with loss of alkaline phosphatase (AP) expression after passages 16-20. Compared with an SV40-LTA immortalized human blood-brain barrier (BBB) endothelial cell line, there was increased γ-GT protein expression, equivalent expression of organic anion transporting polypeptide-C (OATP-C), organic anion transporter 3 (OAT-3), MCT-1 and LAT-1, and reduced expression of AP, CRT and P-gp by the BNB cell line at passage 20. Further studies demonstrated lower transendothelial electrical resistance (TEER: ~181 Ω.cm2 vs. 191 Ω.cm2), equivalent permeability to fluoresceinated sodium (4.84% vs. 4.39%) and lower permeability to fluoresceinated high molecular weight (70 kDa) dextran (0.39% vs. 0.52%) by the BNB cell line. This cell line retained essential molecular and biophysical properties suitable for in vitro peripheral nerve permeability studies.
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影响因子：
12.7
作者：
Mizisin AP;Weerasuriya A
通讯作者：
Weerasuriya A
DOI：
10.1007/s004290050248
发表时间：
1999-06-01
期刊：
ANATOMY AND EMBRYOLOGY
影响因子：
--
作者：
Orte, C;Lawrenson, JG;Allt, G
通讯作者：
Allt, G
影响因子：
14.5
作者：
BELL, MA;WEDDELL, AGM
通讯作者：
WEDDELL, AGM
影响因子：
4.8
作者：
Hsiang, BN;Zhu, YJ;Kirchgessner, TG
通讯作者：
Kirchgessner, TG
影响因子：
2.7
作者：
SCHWARTZ, B;VICART, P;PAULIN, D
通讯作者：
PAULIN, D