Epitope-preserving magnified analysis of proteome (eMAP).
Epitope-preserving magnified analysis of proteome (eMAP).
复制标题
DOI：
10.1126/sciadv.abf6589
复制
发表时间：
2021-11-12
期刊：
影响因子：
13.6
通讯作者：
Chung K
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Park J;Khan S;Yun DH;Ku T;Villa KL;Lee JE;Zhang Q;Park J;Feng G;Nedivi E;Chung K
eMAP通过在可溶胀的组织-凝胶网络中的纯物理组织-水凝胶杂交来保留表位。合成的组织水凝胶方法已经使得使用衍射极限显微镜的生物系统的超分辨率研究成为可能。然而，固定剂的化学修饰可导致抗原性丧失，限制了组织凝胶的分子询问。在这里，我们提出了保留表位放大分析的蛋白质组（eMAP），使用纯物理组织凝胶杂交，以尽量减少抗原性的损失，同时允许永久锚定的生物分子。我们用小鼠和绒猴大脑的突触抗体分别取得了96%和94%的成功率。抗原性的最大保留允许在1000倍扩展组织中的纳米级结构的成像，而无需额外的信号放大。eMAP处理的组织凝胶可以承受重复染色和脱色，而没有表位丢失或结构损伤，从而实现高度多重的蛋白质组学分析。我们通过研究小鼠大脑新皮层中抑制性突触的分子异质性和表征小鼠和绒猴大脑中突触内突触蛋白的空间分布，证明了eMAP作为纳米级蛋白质组询问工具的实用性。
eMAP preserves epitopes by purely physical tissue-hydrogel hybridization in swellable tissue-gel networks. Synthetic tissue-hydrogel methods have enabled superresolution investigation of biological systems using diffraction-limited microscopy. However, chemical modification by fixatives can cause loss of antigenicity, limiting molecular interrogation of the tissue gel. Here, we present epitope-preserving magnified analysis of proteome (eMAP) that uses purely physical tissue-gel hybridization to minimize the loss of antigenicity while allowing permanent anchoring of biomolecules. We achieved success rates of 96% and 94% with synaptic antibodies for mouse and marmoset brains, respectively. Maximal preservation of antigenicity allows imaging of nanoscopic architectures in 1000-fold expanded tissues without additional signal amplification. eMAP-processed tissue gel can endure repeated staining and destaining without epitope loss or structural damage, enabling highly multiplexed proteomic analysis. We demonstrated the utility of eMAP as a nanoscopic proteomic interrogation tool by investigating molecular heterogeneity in inhibitory synapses in the mouse brain neocortex and characterizing the spatial distributions of synaptic proteins within synapses in mouse and marmoset brains.
登录
查看更多内容
树突状GABA能抑制的输入特异性NMDAR依赖性增强。
影响因子：
16.2
作者：
Chiu CQ;Martenson JS;Yamazaki M;Natsume R;Sakimura K;Tomita S;Tavalin SJ;Higley MJ
通讯作者：
Higley MJ
光学成像。膨胀显微镜。
DOI：
10.1126/science.1260088
发表时间：
2015-01-30
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Chen F;Tillberg PW;Boyden ES
通讯作者：
Boyden ES
影响因子：
16.2
作者：
Dani, Adish;Huang, Bo;Bergan, Joseph;Dulac, Catherine;Zhuang, Xiaowei
通讯作者：
Zhuang, Xiaowei
DOI：
10.1073/pnas.0810149105
发表时间：
2008-12-16
影响因子：
11.1
作者：
Lee, Wei-Chung Allen;Chen, Jerry L.;Nedivi, Elly
通讯作者：
Nedivi, Elly
影响因子：
16.2
作者：
Miller CT;Freiwald WA;Leopold DA;Mitchell JF;Silva AC;Wang X
通讯作者：
Wang X