Optimization of GFP Fluorescence Preservation by a Modified uDISCO Clearing Protocol.
Optimization of GFP Fluorescence Preservation by a Modified uDISCO Clearing Protocol.
复制标题
通过修改的 uDISCO 清除协议优化 GFP 荧光保存
DOI：
10.3389/fnana.2018.00067
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发表时间：
2018
影响因子：
2.9
通讯作者：
Zhu D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li Y;Xu J;Wan P;Yu T;Zhu D
组织光学透明技术为大体积标本的成像提供了替代方法。uDISCO是一种基于有机溶剂的方法，通过实现具有高透明度、尺寸减小和荧光保留的全脑成像，从大量可用的光学透明方法中脱颖而出。在这项研究中，我们的目的是修改uDISCO协议，以实现更好的荧光保存，从而进一步提高其光学成像质量。首先，我们确定了优化的uDISCO的最佳pH值，称为“a-uDISCO”（基于碱性pH的uDISCO）。然后，我们比较了a-uDISCO和uDISCO之间的荧光保存。此外，我们根据几个参数验证了优化方法的清除性能，包括组织透明度、尺寸变化和细胞形态的保持。最后，我们证明了a-uDISCO能够实现神经元结构的高质量全脑可视化。该方法可能为低水平荧光蛋白表达的样品的高通量成像或罕见样品的存档和重复重访提供更好的替代方案。
Tissue optical clearing techniques provide alternative approaches for imaging large-volume specimens. uDISCO, an organic-solvent-based method, stands out from the enormous array of available optical clearing methods by achieving whole-brain imaging with high transparency, size reduction and fluorescence preservation. In this study, we aimed to modify the uDISCO protocol to achieve better fluorescence preservation and to thereby further improve its optical imaging quality. First, we determined the optimal pH value for optimized uDISCO, termed “a-uDISCO” (alkaline pH-based uDISCO). Then, we compared fluorescence preservation between a-uDISCO and uDISCO. In addition, we validated the clearing performance of the optimized method according to several parameters, including tissue transparency, size changes, and the maintenance of cell morphology. Finally, we demonstrated that a-uDISCO enabled the high-quality brain-wide visualization of neuronal structures. This method potentially provides a better alternative for high-throughput imaging of samples with low-level fluorescence protein expression or for archiving and repetitive revisiting of rare samples.
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